[發(fā)明專利]使用2-羥基異己酸-CoA轉(zhuǎn)移酶生成聚羥基鏈烷酸酯的方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201880014308.8 | 申請(qǐng)日： | 2018-02-26 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN110382699A | 公開(kāi)（公告）日： | 2019-10-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 李相燁;J·E·楊;樸時(shí)載 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 韓國(guó)科學(xué)技術(shù)院 |
| 主分類號(hào)： | C12N15/63 | 分類號(hào)： | C12N15/63;C12N9/10;C12P7/62;C08G63/688 |
| 代理公司： | 北京坤瑞律師事務(wù)所 11494 | 代理人： | 陳桉 |
| 地址： | 韓國(guó)*** | 國(guó)省代碼： | 韓國(guó);KR |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 聚羥基鏈烷酸酯 芳香族單體 重組微生物 長(zhǎng)鏈 羥基 聚羥基鏈烷酸 可生物降解 聚合物 基因 合酶 | ||
1.一種重組微生物，其是通過(guò)將編碼2-羥基異己酸-CoA轉(zhuǎn)移酶的基因和編碼聚羥基鏈烷酸合酶的基因?qū)肽軌驈奶荚瓷梢阴?CoA的微生物所獲得的，其中所述重組微生物能夠生成具有芳香族單體或長(zhǎng)鏈2-羥基鏈烷酸酯(2-HA)單體的聚羥基鏈烷酸酯。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的重組微生物，其中所述聚羥基鏈烷酸合酶是衍生自選自以下的菌株的PHA合酶：真養(yǎng)雷氏菌(Ralstonia eutropha)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、芽孢桿菌屬(Bacillus)和假單胞菌屬物種(Pseudomonas sp.)6-19，或是具有選自以下的氨基酸序列的PHA合酶的突變酶：
在SEQ ID NO:2的氨基酸序列中具有選自E130D、S325T、L412M、S477R、S477H、S477F、S477Y、S477G、Q481M、Q481K和Q481R的至少一個(gè)突變的氨基酸序列；
在SEQ ID NO:2的氨基酸序列中具有E130D、S325T、L412M、S477G和Q481M突變的氨基酸序列(C1335)；
在SEQ ID NO:2的氨基酸序列中具有E130D、S477F和Q481K突變的氨基酸序列(C1310)；和
在SEQ ID NO:2的氨基酸序列中具有E130D、S477F和Q481R突變的氨基酸序列(C1312)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的重組微生物，其中所述2-羥基異己酸-CoA轉(zhuǎn)移酶是衍生自艱難梭菌(Clostridium difficile)630的HadA。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的重組微生物，其中所述2-羥基異己酸-CoA轉(zhuǎn)移酶使用乙酰-CoA作為CoA供體。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的重組微生物，其中所述芳香族單體或長(zhǎng)鏈2-HA單體選自2-羥基異己酸酯、2-羥基己酸酯、2-羥基辛酸酯、苯基乳酸酯、2-羥基-4-苯基丁酸酯、3-羥基-3-苯基丙酸酯、4-羥基苯甲酸和扁桃酸酯。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的重組微生物，其中所述重組微生物被進(jìn)一步導(dǎo)入有編碼β-酮硫解酶的基因和編碼乙酰乙酰-CoA還原酶的基因。
7.一種生成具有芳香族單體或長(zhǎng)鏈2-羥基鏈烷酸酯(2-HA)單體的聚羥基鏈烷酸酯的方法，所述方法包括：
(a)培養(yǎng)根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)的重組微生物，以生成具有芳香族單體或長(zhǎng)鏈2-HA單體的聚羥基鏈烷酸酯，以及
(b)回收所生成的具有芳香族單體或長(zhǎng)鏈2-HA單體的聚羥基鏈烷酸酯。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中在含有芳香族單體或長(zhǎng)鏈2-HA單體的培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述重組微生物。
9.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中所述芳香族單體或長(zhǎng)鏈2-HA單體選自2-羥基異己酸酯、2-羥基己酸酯、2-羥基辛酸酯、苯基乳酸酯、2-羥基-4-苯基丁酸酯、3-羥基-3-苯基丙酸酯、4-羥基苯甲酸和扁桃酸酯。
10.一種重組微生物，其是通過(guò)將以下基因?qū)肽軌驈奶荚瓷梢阴?CoA的微生物所獲得的：編碼2-羥基異己酸-CoA轉(zhuǎn)移酶的基因、編碼聚羥基鏈烷酸合酶的基因、編碼3-脫氧-D-阿拉伯-庚酮糖酸-7-磷酸(DAHP)合酶的基因、編碼分支酸變位酶/預(yù)苯酸脫氫酶的基因、和編碼D-乳酸脫氫酶的基因，其中所述重組微生物能夠生成具有苯基乳酸酯作為單體的聚羥基鏈烷酸酯。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的重組微生物，其中所述2-羥基異己酸-CoA轉(zhuǎn)移酶是衍生自艱難梭菌(Clostridium difficile)630的HadA。
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