[發明專利]細胞培養方法以及細胞培養系統

在審

• 申請號: 201880012633.0
• 申請日: 2018-01-25
• 公開（公告）號: CN110312787A
• 公開（公告）日: 2019-10-08
• 發明（設計）人: 戶谷貴彥;松岡洋佑;田中鄉史
• 申請（專利權）人: 東洋制罐集團控股株式會社
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;C12M1/00;C12M3/00
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 曹陽

本發明提供細胞培養方法及細胞培養系統，以接觸角為84°以下、并且選自聚乙烯、聚丙烯、聚甲基戊烯、環狀烯烴聚合物、環狀烯烴共聚物、聚氯乙烯、聚氨酯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚酯、聚酰胺、離聚物、乙烯－乙酸乙烯酯共聚物、乙烯－乙烯醇共聚物、乙烯－丙烯酸共聚物、乙烯－丙烯酸甲酯共聚物、乙烯－甲基丙烯酸共聚物、乙烯－甲基丙烯酸甲酯共聚物等中、并且進行了輻射處理或親水化處理的基材形成培養容器的培養面的至少一部分，在培養容器中收容含有作為細胞粘附因子的層粘連蛋白或其片段的培養基和細胞，培養貼壁細胞，由此能夠不向培養容器涂布層粘連蛋白地合適地培養貼壁細胞。

技術領域

本發明涉及細胞的培養技術，特別涉及使細胞粘附于培養容器而進行培養的細胞培養方法以及細胞培養系統。

背景技術

近年來，在醫藥品的生產、基因治療、再生醫療、免疫療法等領域中，要求在人工環境下高效地大量培養細胞或組織、微生物等。

在此種狀況下，實行向培養容器注入細胞和培養基、并培養細胞的做法。

通常，在培養容器中對多能干細胞(iPS細胞等)、胚胎干細胞(ES細胞)進行粘附培養的情況下，需要向培養容器的培養面涂布層粘連蛋白等細胞粘附因子的前處理(參照專利文獻1)。具體而言，例如將層粘連蛋白溶液加入培養容器，在37℃靜置1小時以上而進行層粘連蛋白的涂布后，從培養容器除去層粘連蛋白溶液，將細胞和培養基加入培養容器，進行細胞的粘附培養。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：日本特開2015－178526號公報

發明內容

發明所要解決的問題

然而，為了像這樣對細胞進行粘附培養，必須向培養容器涂布層粘連蛋白，存在有操作煩雜的問題。另外，在供給已涂布層粘連蛋白的培養容器的情況下，存在有其制造、品質管理辛苦的問題。

因而，本發明人等對于是否可以如下所示地培養進行了研究，即，不向培養容器涂布層粘連蛋白，而是使層粘連蛋白混合于培養基中而進行培養，由此使細胞粘附于培養容器而培養。

其結果是，在使用了由疏水性材料形成的培養容器的情況下，即使使層粘連蛋白混合于培養基中而進行培養，也無法使細胞粘附于培養容器而培養。對于其理由可以如下所示地推測。

如圖1所示，在培養基中含有各種各樣的蛋白質，培養容器的培養面成為由白蛋白等蛋白質覆蓋的狀態。此時，在培養面由親水性材料形成的情況下，可以認為，因層粘連蛋白與白蛋白等在培養面發生交換吸附，而將層粘連蛋白涂布于培養面。另一方面，在培養面由疏水性材料形成的情況下，可以認為，由于白蛋白等與培養面疏水結合，因此無法與層粘連蛋白交換吸附，無法將層粘連蛋白涂布于培養面。

此處，專利文獻1中記載的發明中，雖然向培養容器涂布層粘連蛋白，然而對于使用添加有層粘連蛋白的培養基培養細胞的情況也有記載。

然而，對于用于實現它的具體構成沒有給出，對于使用何種特性的培養容器才可以使用添加有層粘連蛋白的培養基培養細胞沒有研究。

本發明是鑒于上述情況而完成的，其目的在于，提供能夠在不向培養容器涂布層粘連蛋白的情況下合適地培養貼壁細胞的細胞培養方法及細胞培養系統。

用于解決問題的方法