[發明專利]免疫改造的多能細胞

在審

• 申請號: 201880006714.X
• 申請日: 2018-01-14
• 公開（公告）號: CN110177869A
• 公開（公告）日: 2019-08-27
• 發明（設計）人: S·施雷普菲;T·德烏瑟
• 申請（專利權）人: 加利福尼亞大學董事會
• 主分類號: C12N5/074
• 分類號: C12N5/074;A61K35/545;C12N15/113
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 張小勇

1.一種產生低免疫原性多能干細胞的方法，其包括：

a.消除誘導性多能干細胞(iPSC)中B2M基因的兩個等位基因的活性；

b.消除所述iPSC中CIITA基因的兩個等位基因的活性；和

c.增加所述iPSC中CD47的表達。

2.權利要求1的方法，其中所述iPSC是人的，所述B2M基因是人的，所述CIITA基因是人的，并且增加的CD47表達是由于將至少一個拷貝的在啟動子控制下的人CD47基因引入所述iPSC細胞中引起的。

3.權利要求1的方法，其中所述iPSC是鼠的，所述B2m基因是鼠的，所述Ciita基因是鼠的，并且增加的Cd47表達是由于將至少一個拷貝的在啟動子控制下的鼠Cd47基因引入所述iPSC細胞中引起的。

4.權利要求2-3任一項的方法，其中所述啟動子是組成型啟動子。

5.權利要求1-3中任一項的方法，其中所述B2M基因的兩個等位基因的所述破壞是由破壞所述B2M基因的兩個等位基因的成簇規律間隔短回文重復序列/Cas9(CRISPR)反應引起的。

6.權利要求1-3中任一項的方法，其中所述CIITA基因的兩個等位基因的所述破壞是由破壞所述CIITA基因的兩個等位基因的CRISPR反應引起的。

7.一種人低免疫原性多能干細胞(hHIP)，其包含：

a.使內源B2M基因的兩個等位基因失活的一個或多個改變；

b.使內源CIITA基因的兩個等位基因失活的一個或多個改變；和

c.在所述hHIP干細胞中引起增加的CD47基因表達的改變；

其中所述hHIP干細胞引發第一天然殺傷(NK)細胞應答，其低于由誘導性多能干細胞(iPSC)引發的第二NK細胞應答，所述iPSC包含所述B2M和CIITA改變但不包含所述增加的CD47基因表達，并且其中所述第一和第二NK細胞應答是通過測定與所述hHIP或iPSC體外孵育的NK細胞的IFN-γ水平來測量的。

8.一種人低免疫原性多能干細胞(hHIP)，其包含：

a.使內源B2M基因的兩個等位基因失活的一個或多個改變；

b.使內源CIITA基因的兩個等位基因失活的一個或多個改變；和

c.在所述hHIP干細胞中引起增加的CD47基因表達的一個或多個改變；

其中所述hHIP干細胞在人源化小鼠品系中引發第一T細胞應答，其低于在所述人源化小鼠品系中由iPSC引發的第二T細胞應答，并且其中所述第一和第二T細胞應答是通過在Elispot測定中測定來自所述人源化小鼠的IFN-γ水平來測量的。

9.一種方法，其包括將權利要求7或8中任一項的hHIP干細胞移植到人受試者中。

10.一種低免疫原性多能細胞，其包含：

a.與親本多能細胞相比降低的內源主要組織相容性I類抗原(HLA-I)功能；

b.與所述親本多能細胞相比降低的內源主要組織相容性II類抗原(HLA-II)功能；和

c.與所述親本多能細胞相比降低的對NK細胞殺傷的敏感性；

其中所述低免疫原性多能細胞在移植入受試者時由于所述降低的HLA-I功能、所述降低的HLA-II功能和降低的對NK細胞殺傷的敏感性而對排斥反應較不敏感。

11.權利要求10的低免疫原性多能細胞，其中所述HLA-I功能通過降低β-2微球蛋白表達而降低。

12.權利要求11的低免疫原性多能細胞，其中敲除編碼所述β-2微球蛋白的基因。

13.權利要求12的低免疫原性多能細胞，其中所述β-2微球蛋白與SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性。