[實(shí)用新型]禾草種帶內(nèi)生真菌鏡檢前種子一體化處理裝置

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201821393252.5
• 申請(qǐng)日: 2018-08-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN209014523U
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-06-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳振江;李春杰;魏學(xué)凱;李振霞;陳昊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘭州大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京中恒高博知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11249
• 代理人: 張亮保

本實(shí)用新型公開(kāi)禾草種帶內(nèi)生真菌鏡檢前種子一體化處理裝置，包括裝置底座、兩根連接管、加熱裝置和盛液圓盤、洗滌盤、裝樣管、放置裝樣管的圓盤、四根支柱、兩個(gè)廣口瓶、一個(gè)浴頭、一個(gè)加樣裝置、三個(gè)滑動(dòng)裝置、一個(gè)發(fā)電機(jī)，將四根支柱分別用螺絲固定在裝置底座上，三根支柱圍繞加熱裝置固定，另一根支柱固定在洗滌盤周圍，在加熱裝置和洗滌盤之間的一根支柱安裝放置裝樣管的圓盤，在加熱裝置周圍的三根支柱分別固定有三個(gè)滑動(dòng)裝置，在三個(gè)滑動(dòng)裝置上分別固定有兩個(gè)改造廣口瓶和加樣裝置，在洗滌盤周圍的支柱上固定有浴頭，浴頭下方用螺絲把兩根連接管跟裝置底座頂部的圓孔固定在一起，連接管內(nèi)連接有洗滌盤。縮減處理時(shí)間、簡(jiǎn)化吸取過(guò)程。

技術(shù)領(lǐng)域

本實(shí)用新型涉及一種大批量禾草種帶內(nèi)生真菌鏡檢前種子一體化處理裝置，它集裝樣，軟化，洗滌，染色和加熱一體化，大大縮減了鏡檢前種子處理時(shí)間、統(tǒng)一了樣品量、強(qiáng)化了染色效果和試劑的循環(huán)利用。

背景技術(shù)

禾草內(nèi)生真菌(grass endophyte)是指在禾草體內(nèi)度過(guò)大部分或者全部生命周期，但卻不會(huì)引起禾草外部顯示任何病害癥狀的一大類真菌。從最初發(fā)現(xiàn)黑麥草(Loliumperenne)和高羊茅(Festuca arundinacea)引起家畜中毒到后來(lái)其攜帶的內(nèi)生真菌被發(fā)現(xiàn)，以及進(jìn)一步的研究證實(shí)，內(nèi)生真菌的存在不但導(dǎo)致家畜中毒而且能顯著提高宿主在群落中的競(jìng)爭(zhēng)力，也因禾草內(nèi)生真菌的這種重要生理和生態(tài)作用，使其逐步成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)之一，這也給內(nèi)生真菌檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展提供了契機(jī)。目前禾草內(nèi)生真菌的檢測(cè)方法有鏡檢和分離檢測(cè)、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(Enzyme-Linked Immunosorbent AssayELISA)、全基因組測(cè)序、實(shí)時(shí)熒光PCR法(Realtime PCR)和利用次生代謝物間接檢測(cè)。

1.鏡檢：(1.)用NaOH種皮軟化；(2.)用自來(lái)水洗滌；(3.)染色；(4.)鏡檢。

2.分離檢測(cè)：用酒精浸泡10min，NaClO浸泡8min，再用無(wú)菌水反復(fù)沖洗數(shù)次，用濾紙吸干后，放置PAD培養(yǎng)，內(nèi)生真菌在PDA培養(yǎng)基生長(zhǎng)一般需要一個(gè)禮拜。

3.酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法：(1.)待檢標(biāo)本提取(2.)用已知特異性抗體包被固相載體；(3.)加待檢標(biāo)本，經(jīng)過(guò)溫育使相應(yīng)抗原與固相抗體結(jié)合；洗滌，除去無(wú)關(guān)的物質(zhì)；(4.)加酶標(biāo)特異性抗體，與已結(jié)合在固相抗體上的抗原反應(yīng)；洗滌，除去未結(jié)合的酶標(biāo)抗體；(5.)加底物顯色。終止反應(yīng)后，目測(cè)定性或用酶標(biāo)儀測(cè)量光密度值進(jìn)行定量測(cè)定。

4.全基因組測(cè)序:提取菌絲DNA，再進(jìn)行測(cè)序。

5.實(shí)時(shí)PCR，該技術(shù)是在常規(guī)PCR的基礎(chǔ)上加入了熒光特殊物質(zhì)來(lái)標(biāo)記產(chǎn)物，分析產(chǎn)物，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算其初始濃度。

6.利用次生代謝物間接檢測(cè)：生物堿的提取，目前對(duì)于生物堿的檢測(cè)主要是運(yùn)用不同的色譜檢測(cè)方法：高效液相色譜法(HPLC)，質(zhì)譜法(MS)和氣相色譜法(GC)。HPLC檢測(cè)生物堿時(shí)需要選擇適合該生物堿分離的流動(dòng)相和檢測(cè)器，不同種類的生物堿，其選擇的流動(dòng)相pH值和濃度不同。