[實(shí)用新型]一種應(yīng)用HRM技術(shù)檢測(cè)ERCC1基因的檢測(cè)試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201821212807.1
• 申請(qǐng)日: 2018-07-27
• 公開（公告）號(hào): CN209039457U
• 公開（公告）日: 2019-06-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 湯俊明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 宜興市人民醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12M1/00
• 分類號(hào): C12M1/00
• 代理公司: 北京文苑專利代理有限公司 11516
• 代理人: 王煒

本實(shí)用新型公開了一種應(yīng)用HRM技術(shù)檢測(cè)ERCC1基因的檢測(cè)試劑盒，包括盒體，盒體的頂端滑動(dòng)連接有盒蓋，盒體內(nèi)部的底端通過(guò)若干減震彈簧與底板固定連接，底板的頂端固定連接有固定座，固定座頂部的一端的穿插連接有HRM反應(yīng)預(yù)混液試劑管、去離子水試劑管和氯化鎂試劑管、上游引物試劑管、下游引物試劑管和備用試劑管，固定座頂端中部的兩側(cè)分別穿插連接有主用PCR反應(yīng)管和備用PCR反應(yīng)管，固定座頂部的另一端穿插連接有若干試管。本實(shí)用新型通過(guò)內(nèi)部結(jié)構(gòu)的設(shè)置，使得該試劑盒具有減震效果；本試劑盒在檢測(cè)ERCC1基因c.118C大于T位點(diǎn)時(shí)具有敏感性高、特異性強(qiáng)、耗時(shí)短等優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本實(shí)用新型涉及一種檢測(cè)試劑盒，特別涉及一種應(yīng)用HRM技術(shù)檢測(cè)ERCC1基因的檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)

ERCC1基因是第1個(gè)被發(fā)現(xiàn)的人類DNA損傷修復(fù)基因，國(guó)內(nèi)外研究表明，ERCC1基因c.118C大于T突變，雖然編碼的氨基酸沒(méi)有發(fā)生變化，但是攜帶T等位基因突變型的ERCC1基因表達(dá)量下降，降低了核苷酸切除修復(fù)能力，導(dǎo)致DNA損傷的修復(fù)能力下降，從而使得患者對(duì)鉑類的化療反應(yīng)更敏感。即ERCC1基因c.118C大于T位點(diǎn)含有T等位基因比不含有T等位基因的患者，對(duì)鉑類化療藥物更為敏感。治療前進(jìn)行ERCC1基因多態(tài)性的檢測(cè)具有重要的指導(dǎo)意義。

檢測(cè)等位基因突變型的方法主要有變性高效液相色譜(DHPLC)，單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)，限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)，Taqman探針?lè)ㄒ约癝anger測(cè)序法等。但是這些檢測(cè)方法或多或少的存在操作步驟繁瑣，檢測(cè)周期長(zhǎng)，檢測(cè)成本較高，靈敏度較低等缺點(diǎn)。高分辨率熔解曲線(high resolution melting，HRM)技術(shù)是一種新的基因分型分析技術(shù)，其原理是擴(kuò)增含突變位點(diǎn)基因的過(guò)程中，由于突變位點(diǎn)不匹配會(huì)導(dǎo)致雙鏈DNA在升溫過(guò)程中會(huì)先解開,熒光染料從局部解鏈的DNA分子上釋放，從熒光強(qiáng)度與時(shí)間曲線上就可以判斷是否存在突變位點(diǎn)。其具有成本低，操作簡(jiǎn)單快速，不易污染，靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。

因此，應(yīng)用HRM技術(shù)檢測(cè)ERCC1基因c.118C大于T位點(diǎn)具有重要的應(yīng)用價(jià)值，目前檢測(cè)使用的試劑原料需多方配備，實(shí)驗(yàn)過(guò)程分步進(jìn)行，耗時(shí)較長(zhǎng)，容易污染，結(jié)果不可靠，所以探索一種適用檢測(cè)ERCC1基因c.118C大于T位點(diǎn)的方法及檢測(cè)試劑盒已經(jīng)成為臨床實(shí)驗(yàn)研究的熱點(diǎn)問(wèn)題。

實(shí)用新型內(nèi)容

本實(shí)用新型的目的在于提供一種應(yīng)用HRM技術(shù)檢測(cè)ERCC1基因的檢測(cè)試劑盒，以解決上述背景技術(shù)中提出的目前檢測(cè)使用的試劑原料需多方配備，實(shí)驗(yàn)過(guò)程分步進(jìn)行，耗時(shí)較長(zhǎng)，容易污染，結(jié)果不可靠的問(wèn)題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型提供如下技術(shù)方案：一種應(yīng)用HRM技術(shù)檢測(cè)ERCC基因c.118C大于T位點(diǎn)檢測(cè)試劑盒，包括盒體，所述盒體的頂端滑動(dòng)連接有盒蓋，所述盒體兩側(cè)的中部均固定連接有把手，所述盒體內(nèi)部的底端與若干減震彈簧的一端固定連接，若干所述減震彈簧的另一端均與底板的底端固定連接，所述底板的頂端固定連接有固定座，所述固定座頂部一端的一側(cè)從左至右依次穿插連接有HRM反應(yīng)預(yù)混液試劑管、去離子水試劑管和氯化鎂試劑管，所述固定座頂部一端的另一側(cè)從左至右依次穿插連接有上游引物試劑管、下游引物試劑管和備用試劑管，所述固定座頂端中部的一側(cè)穿插連接有主用PCR反應(yīng)管，所述固定座頂端中部的另一側(cè)穿插連接有備用PCR反應(yīng)管，所述固定座頂部的另一端穿插連接有若干試管。

作為本實(shí)用新型的一種優(yōu)選技術(shù)方案，所述HRM反應(yīng)預(yù)混液試劑管內(nèi)裝有HRM反應(yīng)預(yù)混液，且所述HRM反應(yīng)預(yù)混液為2×Master Reaction Mix(Roche)。

作為本實(shí)用新型的一種優(yōu)選技術(shù)方案，所述氯化鎂試劑管內(nèi)裝有氯化鎂試劑，且所述氯化鎂試劑濃度為25mmol/L。

作為本實(shí)用新型的一種優(yōu)選技術(shù)方案，所述上游引物試劑管內(nèi)裝有上游引物，所述下游引物試劑管內(nèi)裝有下游引物，且所述上游引物和所述下游引物的濃度均為2pmol/L。

作為本實(shí)用新型的一種優(yōu)選技術(shù)方案，所述固定座由泡沫塑料制成。