[實用新型]一種定量分析CHO宿主細胞DNA殘留試劑盒

有效

• 申請號: 201820832700.0
• 申請日: 2018-05-31
• 公開（公告）號: CN209276520U
• 公開（公告）日: 2019-08-20
• 發明（設計）人: 董先輝;王曉香;陳存款;張娟;鐘健翔
• 申請（專利權）人: 廣州七譜生物醫學科技有限公司
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12M1/24;C12M1/00
• 代理公司: 北京細軟智谷知識產權代理有限責任公司 11471
• 代理人: 付登云

本實用新型涉及一種定量分析CHO宿主細胞DNA殘留試劑盒，包括盒蓋、海綿墊和盒體，所述盒蓋與所述盒體通過鉸鏈相連；所述盒體設有容納腔，所述海綿墊置于所述容納腔內，所述海綿墊上設有容器孔，所述容器孔內分別放置有兩個第一洗滌液試劑瓶、2×結合緩沖液試劑瓶、洗滌液試劑瓶、蛋白酶K試劑瓶、核酸助沉劑EP管、磁珠EP管、CHO DNA標準品EP管、DNA稀釋液EP管、2×PCR終極混合液EP管、CHO引物/探針混合液EP管、陰性對照EP管、滅菌水EP管、參照染料EP管和參照染料II EP管；本實用新型檢測靈敏度良好且不受DNA片段干擾，線性范圍良好，擴增特異性良好不受其他物種DNA干擾。

技術領域

本實用新型涉及生物技術領域，具體涉及一種高靈敏度的定量分析CHO 宿主細胞DNA殘留試劑盒。

背景技術

在現代的生產工藝中，依賴于重組蛋白載體來生產生物制劑已經成為主流技術，CHO細胞作為常用的宿主細胞系用于生產生物制劑，而蛋白產品中含有殘留的宿主細胞DNA是潛在的安全隱患，因此蛋白制品中DNA殘留的多少是生產所必須嚴格把控的。

目前，檢測外源DNA殘留量的方法有DNA雜交法和熒光染料法。DNA雜交法需要的條件相對簡單，但該方法存在時間長，操作繁瑣，穩定性、敏感性、特異性較差等缺點；熒光染料法是利用PicoGreen這種高靈敏度的雙鏈DNA 熒光染料對DNA含量進行定量測定。該方法的檢驗靈敏度可達300pg/mL，但良好的線性范圍在DNA 1.25～80ng/mL(R²≥0.99)，同時，該方法缺點為容易受到RNA、ssDNA、dsDNA的干擾，另一方面，針對生物制品成品中宿主細胞DNA殘留量往往低于有效的線性范圍DNA(1.25～80ng/mL)。

因此，目前尚存在生物制品成品中DNA殘留無法準確定量的問題。

實用新型內容

為了解決現有技術存在的問題，本實用新型提供了一種定量分析CHO宿主細胞DNA殘留試劑盒，包括通過鉸鏈相連的盒蓋和盒體，盒體內設有海綿墊，海綿墊設有容納腔，容納腔內分別放置裝有洗滌液、2×結合緩沖液、蛋白酶K；核酸助沉劑、磁珠、CHO DNA標準品、DNA稀釋液、2×PCR終極混合液、CHO引物/探針混合液、陰性對照、滅菌水、參照染料和參照染料II的試劑瓶和EP管，本實用新型檢測靈敏度高，線性范圍良好，擴增特異性良好。

本實用新型的目的是提供一種高靈敏度的定量分析CHO宿主細胞DNA 殘留試劑盒，包括盒蓋、海綿墊和盒體，所述盒蓋與所述盒體通過鉸鏈相連；所述盒體設有容納腔，所述海綿墊置于所述容納腔內，所述海綿墊上設有容器孔，所述容器孔內分別放置有第一試劑瓶、第二試劑瓶、第三試劑瓶和EP管；所述第一試劑瓶包括兩個第一洗滌液試劑瓶；所述第二試劑瓶包括2×結合緩沖液試劑瓶；所述第三試劑瓶包括洗滌液試劑瓶和蛋白酶K試劑瓶；所述EP管包括核酸助沉劑EP管、磁珠EP管、CHO DNA標準品EP管、DNA稀釋液EP 管、2×PCR終極混合液EP管、CHO引物/探針混合液EP管、陰性對照EP管、滅菌水EP管、參照染料EP管和參照染料II EP管。

優選地，所述第一試劑瓶包括兩個裝有100ml洗滌液試劑瓶；所述第二試劑瓶包括裝有40ml 2×結合緩沖液試劑瓶；所述第三試劑瓶包括裝有5ml洗滌液試劑瓶和裝有5ml蛋白酶K試劑瓶；所述EP管包括裝有100μl核酸助沉劑 EP管、裝有1ml磁珠EP管、0.5ml CHODNA標準品EP管、0.54ml DNA稀釋液EP管、0.75ml 2×PCR終極混合液EP管、0.3ml CHO引物/探針混合液EP 管、0.5ml陰性對照EP管、0.5ml滅菌水EP管、20μl參照染料EP管和20μl 參照染料II EP管。

本實用新型在分析CHO細胞核酸重復序列的基礎上，選擇了一系列高度重復序列作為定量分析基因，使用Taqman探針法qPCR技術將檢測靈敏度大大提高2個數量級(5pg/mL)，檢測上限提高了2個數量級(50000ng/mL)，良好的線性范圍在DNA 5pg～50000ng/mL(R²≥0.99)。