[實用新型]一種大鼠骨髓來源內皮祖細胞分離、培養試劑盒

有效

• 申請號: 201820486062.1
• 申請日: 2018-04-08
• 公開（公告）號: CN208684976U
• 公開（公告）日: 2019-04-02
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 武漢普諾賽生命科技有限公司
• 主分類號: C12M3/00
• 分類號: C12M3/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本實用新型公開了一種大鼠骨髓來源內皮祖細胞分離、培養試劑盒，包括盒體、試劑架和蓋體，所述盒體的內部固定有試劑架，試劑架上的一側分別設有一個組織清洗液放置區、一個細胞洗滌液放置區以及兩個細胞培養液放置區，試劑架上的另一側分別設有一個骨髓沖洗液放置區、一個細胞分離液放置區、一個紅細胞裂解液放置區、一個接種包被液放置區、一個細胞消化液放置區。本實用新型提供了大鼠骨髓來源內皮祖細胞分離、培養過程中涉及到的所有試劑，并且提供了一套經過反復優化的細胞分離、培養方案，實驗人員可參照優化的實驗方案、使用試劑盒內的試劑簡便、快速地完成大鼠骨髓來源內皮祖細胞分離、培養實驗。

技術領域

本實用新型涉及生物技術領域，具體為一種大鼠骨髓來源內皮祖細胞分離、培養試劑盒。

背景技術

內皮祖細胞(Endothelial Progenitor Cells，EPCs)是血管內皮細胞的前體細胞，亦稱為成血管細胞(Angioblast)，在生理或病理因素刺激下，可從骨髓動員到外周血參與損傷血管的修復。1997年，Asahara等首次證明循環外周血中存在能分化為血管內皮細胞的前體細胞，并將其命名為血管內皮祖細胞。EPCs是一群具有游走特性，能進一步增殖分化的幼稚內皮細胞，缺乏成熟內皮細胞的特征性表型，其功能主要為參與了出生后缺血組織的血管發生和血管損傷后的修復。研究顯示，EPCs在血管再生和心血管疾病的細胞治療和基因治療中具有廣闊的應用前景。例如，利用EPCs修復心肌梗死患者的心臟，治療Ⅰ臨床肢體缺血，治療冠狀動脈疾病，改善血管移植物的通暢率，改善糖尿病患者的血管形成能力，定向抑制腫瘤血管生成，作為基因治療導向載體和靶細胞，等等，并為缺血性疾病的研究治療提供了新思路，EPCs生物學特性和治療作用的研究成為這一領域新的熱點。

內皮祖細胞主要存在于骨髓、臍血和外周血等組織中，三者內皮祖細胞含量之比約為15:10:1；其中，外周血內皮祖細胞占外周血細胞比例約為0.01%，骨髓來源內皮祖細胞在骨髓中的比例僅為0.1-0.15%，含量極少。眾多來源的內皮祖細胞中，骨髓來源內皮祖細胞應用相對廣泛，由于骨髓采集方便、易于獲取，備受實驗研究人員的親睞。目前，關于EPCs分離、培養的方法過程繁復，研究人員實驗前后需要準備的試劑、耗材很多，且最終細胞得率較低；極大地耗損了實驗人員的精力，并無形中延長了整個實驗研究周期，給相關實驗人員帶來了不便。

發明內容

本實用新型的目的在于為了解決骨髓來源內皮祖細胞分離、培養過程中，耗時長、成本高、效率低等技術問題，本實用新型提供了一種大鼠骨髓來源內皮祖細胞分離、培養試劑盒，該試劑盒中所有試劑均為無菌，可供實驗人員方便、快捷使用，大大縮短了細胞分離前期試劑配制及準備工作所消耗的時間。

為實現上述目的，本實用新型提供如下技術方案：一種大鼠骨髓來源內皮祖細胞分離、培養試劑盒，包括盒體、試劑架和蓋體，所述盒體的內部固定有試劑架，試劑架上的一側分別設有一個組織清洗液放置區、一個細胞洗滌液放置區以及兩個細胞培養液放置區，試劑架上的另一側分別設有一個骨髓沖洗液放置區、一個細胞分離液放置區、一個紅細胞裂解液放置區、一個接種包被液放置區、一個細胞消化液放置區。

優選的，所述試劑架為泡沫材料制備的支架。

優選的，所述組織清洗液放置區內放置有一個盛放100mL組織清洗液的無菌、密封塑料方瓶，且組織清洗液主要由磷酸鹽緩沖液、青-鏈霉素組成。

優選的，所述骨髓沖洗液放置區內放置有一個盛放50mL骨髓沖洗液的無菌、密封試劑瓶，且骨髓沖洗液主要由DMEM/F12基礎培養基、青-鏈霉素組成。

優選的，所述細胞分離液放置區內放置有一個盛放50mL細胞分離液的無菌、密封試劑瓶，且細胞分離液主要由Percoll組成。

優選的，所述紅細胞裂解液放置區內放置有一個盛放50mL紅細胞裂解液的無菌、密封試劑瓶，且紅細胞裂解液主要由KHCO₃、NH₄Cl、EDTA-Na₂組成。