[實用新型]改良超濾離心法制備富含α2巨球蛋白血清的裝置

有效

• 申請號: 201820360945.8
• 申請日: 2018-03-16
• 公開（公告）號: CN208649177U
• 公開（公告）日: 2019-03-26
• 發明（設計）人: 王小虎;魏壘;衛小春;李鵬翠
• 申請（專利權）人: 王小虎;魏壘;衛小春;李鵬翠
• 主分類號: C07K14/81
• 分類號: C07K14/81;C07K1/34
• 代理公司: 太原晉科知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 14110
• 代理人: 任林芳

本實用新型涉及血液制品技術領域，特別是一種改良超濾離心法制備富含α2巨球蛋白血清的裝置,解決了現有的α2巨球蛋白的提純方法存在提取步驟繁瑣，提取的過程中存在蛋白活性逐步降低并且復雜的提取過程也加大了血液制品污染概率的問題，其包括離心管和抽吸裝置，離心管包括普通離心管和超濾離心管，第一抽吸裝置的兩端分別連接目標血液和普通離心管，第二抽吸裝置的兩端分別通過導管連接普通離心管容置上清液的部位和超濾離心管的底部，所述的第三抽吸裝置的兩端分別通過導管連接超濾離心管容置上清液的部位和富含α2巨球蛋白血清收集器。本實用新型分離過程不會對生物分子的活性造成破壞，回收率高，重現性好。

技術領域

本實用新型涉及血液制品制備的技術領域，特別是一種改良超濾離心法制備富含α2巨球蛋白血清的裝置。

背景技術

創傷性關節炎（Post-traumatic Osteoarthritis，PTOA）作為骨關節炎（osteoarthritis，OA）的一種主要類型，主要由創傷引起的以關節軟骨退化和繼發軟骨骨化為主要病理變化，以關節疼痛、活動功能障礙為主要臨床表現的一種疾病。前交叉韌帶（anterior cruciate ligament, ACL）損傷在青壯年中是最常見的膝關節韌帶損傷之一，其在美國的發病率約為0.1%。國內有學者報道，我國現役集訓運動員ACL損傷的總發病率為0.47%。大量研究表明，ACL損傷患者發生PTOA的風險明顯增高。

目前，臨床上ACL重建手術為ACL損傷患者早期治療的主要技術方法。美國每年行ACL重建手術的數量超過50萬例。中國雖沒有具體統計數字，但鑒于中國人口數量巨大，臨床實踐中也是非常多見。ACL重建手術可重建ACL損傷患者膝關節的穩定性，成為目前ACL損傷后最佳的治療方法。但是，最新的一些研究發現，ACL重建術并不能降低ACL損傷患者繼發PTOA的風險和進程，其主要原因為在關節創傷后1周內關節腔局部出現大量的炎癥因子，如MMP家族、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）、IL、整合素樣金屬蛋白酶(adisintegrin and metallo-proteinase with thrombospondin motifs，ADAMTSs)及氧自由基等，促使大量的軟骨細胞凋亡，成為啟動關節軟骨退變和損傷的關鍵環節。因此，ACL損傷后1周內成為早期防治PTOA的“黃金時間”。

α2巨球蛋白(α2-macroglobulin, α2-M)是血漿中含量豐富的大分子糖蛋白，是一種廣譜的蛋白酶抑制劑，血漿蛋白濃度為60-80mg/ml, 而α2-M在血漿中的濃度為2.2-2.3mg/ml，占血漿蛋白總量的2.5-3.7%。α2巨球蛋白的功能主要通過調節內源或外源性蛋白酶廣泛參與許多重要的生理病理過程。其相對分子質量為725000，由大小為180000的四個相同亞基組成，其中兩個亞基通過二硫鍵連接成二聚體，兩個二聚體再通過非共價鍵形成四聚體，每一個亞基上均含有5個功能區，分別是誘餌區、內部硫酯鍵、受體結合位點、谷氨酰胺轉移酶反應位點以及鋅離子結合位點。α2-M還通過與細胞因子、生長因子和激素等分子結合調節它們在體內的分布、半衰期和生物學活性。

通過體內外研究發現，200nm的α2-M可有效地抑制IL-1誘導的體外培養軟骨細胞MMP-3、9、13和多種炎癥因子的活性，如IL-1β、6、8, TNF-a和粒-巨噬細胞集落刺激因子（granulocyte macrophage-colony stimulating factor，GM-CSF）。同時在大鼠前交叉韌帶切斷模擬PTOA的大鼠模型中，在關節內定時注射補充α2-M可以有效的減少關節液中MMP-13的濃度，組織學上也證實α2-M可以有效的延緩PTOA的病理進程，并且存在劑量依賴性。同時我們的研究也發現α2-M對PTOA相關正性基因的表達具有上調作用，對負性基因具有下調作用。因此，關節內早期補充外源性α2-M對前交叉韌帶損傷后導致的創傷性關節炎（PTOA）大鼠的軟骨損傷具有積極的正性保護作用。