[實用新型]用于快速檢測II型鯉皰疹病毒的RPA檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201820176594.5
• 申請日: 2018-02-01
• 公開（公告）號: CN207944113U
• 公開（公告）日: 2018-10-09
• 發明（設計）人: 呂利群;孫萌;王浩;周書亭;劉宇斯
• 申請（專利權）人: 上海海洋大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司 31227
• 代理人: 曹莉

本實用新型公開了用于快速檢測II型鯉皰疹病毒的RPA檢測試劑盒，包括：包裝盒、內含正向引物和反向引物的RPA反應液管、陽性對照管、陰性對照管、試紙條裝置、至少1個反應容器和至少1個反應架；其中，所述試紙條裝置包括試紙條體和試紙條蓋，所述試紙條體包括側向流動免疫層析試紙條，試紙條自下而上依次為反應區、質控區和檢測區，質控區和監測區外側設置有透明的聚乙烯材料外殼，且外殼靠近反應區的端部設置有螺紋，并與試紙條蓋螺紋連接；上述RPA檢測試劑盒檢測速度快、時間短，效率高，便于攜帶，適合早期獸醫臨床檢測。

技術領域

本實用新型涉及檢測試劑盒，具體涉及用于快速檢測II型鯉皰疹病毒的RPA檢測試劑盒。

背景技術

皰疹病毒性造血器官壞死病(herpesviral haematopoietic necrosis,HVNV)是一種鯽魚的高致病性病，其病原體為II型鯉皰疹病毒(cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)，鯽魚患上這種病后，體表出血，伴隨眼球和腹部膨脹，內臟器官嚴重出血，鰾壁斑點狀突出，該病毒致死率高達90％以上，而且存在垂直傳播的情況，感染該病毒后魚的魚苗和魚卵中都能發現該病毒。該種病毒的傳統檢測方法大都存在特異性和敏感性差、操作繁瑣、費時費力等缺點，不能滿足獸醫臨床現地檢測需要。

重組酶聚合酶擴增技術(RPA)是利用重組酶和單鏈結合蛋白在常溫下協同實現引物與模板的特異結合，以代替傳統PCR熱循環中變性和復性過程的新型恒溫體外核酸擴增技術。RPA與側向流動免疫層析技術(LFD)相結合的方法具有判斷結果肉眼可判讀，檢測方便，反應時間在10min內，便于攜帶等優點，其反應原理是羧基熒光素(FAM)標記的特異探針與生物素(Biotin)標記的核酸擴增產物特異性結合，將其滴加于試紙條上便會與膠體金標記的抗FAM的抗體結合，形成三元復合物，當擴散到檢測線時，三元復合物被生物素配體捕獲，形成有顏色的檢測線。RPA檢測手段操作簡單、反應快速、檢測成本低、結果確實可靠，用于II型鯉皰疹病毒的快速檢測快速、可靠，且應用前景廣闊。

實用新型內容

為克服現有技術的上述缺陷，本實用新型的目的在于提供一種用于快速檢測II型鯉皰疹病毒的RPA檢測試劑盒。

本實用新型的上述目的通過以下技術方案實現：

用于快速檢測II型鯉皰疹病毒的RPA檢測試劑盒，包括：包裝盒、內含正向引物和反向引物的RPA反應液管、陽性對照管、陰性對照管、試紙條裝置、至少1個反應容器和至少1個反應架用于檢測時放置所述試紙條裝置；其中，所述試紙條裝置包括試紙條體和試紙條蓋；所述試紙條體包括側向流動免疫層析試紙條；所述的試紙條自下而上依次為反應區、質控區和檢測區，所述的質控區和監測區外側設置有透明的聚乙烯材料外殼；且所述外殼靠近反應區的端部設置有螺紋，并與所述試紙條蓋螺紋連接。

優選地，所述反應容器為透明聚乙烯材料，且可與所述試紙條體外殼靠近反應區端部的螺紋進行連接。

優選地，所述試紙條體檢測時與所述反應容器螺旋連接，并置于所述反應架內。

優選地，所述陽性對照管內含有ORF72質粒。

優選地，所述陰性對照管內含有無菌ddH₂O。

優選地，所述RPA反應液管包括正向引物、反向引物、酶、Rehydration Buffer、醋酸鎂和水。

需要說明的是，上述技術方案中，試紙條體的里層為側向流動免疫層析試紙條，當試紙條的反應區放入反應容器內進行反應時，因為檢測結果是由下往上跑，所以設計至少一個反應架用于放置螺旋連接好的試紙條體和反應容器觀察試驗結果，判定是否有II型鯉皰疹病毒，既直觀又便捷、衛生，且不影響結果的正確判斷。

與現有技術相比，本實用新型具有如下有益效果：

(1)檢測速度快，效率高，適合于早期檢測；