[發明專利]一種脂肪酶的固定化方法

在審

• 申請號: 201811654095.3
• 申請日: 2018-12-31
• 公開（公告）號: CN109609489A
• 公開（公告）日: 2019-04-12
• 發明（設計）人: 周建根;劉飛;劉成林;范軍偉;盧炳環;王媚艷
• 申請（專利權）人: 無錫優普克生物科技有限公司
• 主分類號: C12N11/08
• 分類號: C12N11/08
• 代理公司: 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙) 11411
• 代理人: 黃冠華

本發明公開了一種脂肪酶的固定化方法，包括如下步驟：1)將Na₂HPO₄溶液和檸檬酸溶液混合均勻，得到Na₂HPO₄?檸檬酸緩沖液；2)將液體脂肪酶溶于Na₂HPO₄?檸檬酸緩沖液中，調節pH值為7.5?8.5，得到酶緩沖溶液；3)將載體加入酶緩沖溶液中，得到載體/脂肪酶混合液，然后將載體/脂肪酶混合液在空氣浴搖床進行固定，經過濾、洗滌、干燥，得到固定化脂肪酶。本發明提供一種脂肪酶的固定化方法，本方法制備的固定化脂肪酶可重復使用，使酶的使用效率提高、使用成本降低；固定化脂肪酶極易與反應體系分離，簡化了提純工藝，而且產品收率高、質量好，酶經固定化后穩定性得到提高，其催化反應過程更易控制。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種脂肪酶的固定化方法。

背景技術

酶是由活細胞產生的、催化特定生物化學反應的一種生物催化劑。酶制劑是酶經過提純、加工后的具有催化功能的生物制品，主要用于催化生產過程中的各種化學反應，具有催化效率高、高度專一性、作用條件溫和、降低能耗、減少化學污染等特點，其應用領域遍布食品、紡織、飼料、洗滌劑、造紙、皮革、醫藥以及能源開發、環境保護等多個方面。

脂肪酶是酶制劑的一個大類，可溶于水溶液中，但其天然底物如油脂卻不溶于水。雖然采用適當的有機溶劑或乳化劑有助于酶與底物的結合，但脂肪酶在非均相反應體系的實際利用中仍存在一些問題，比如反應系統中殘存的酶可能對產物的質量產生不利影響的問題。另外游離酶的使用壽命相對較短，從而使成本增加。如果將脂肪酶固定化，使其在反應體系中成為獨立相，便可通過機械手段固定于反應器中，這樣就不會污染產物，使用壽命也大大延長。

固定化酶(immobilized enzyme)是20世紀60年代發展起來的一種新技術。所謂固定化酶，是指在一定的空間范圍內起催化作用，并能反復和連續使用的酶。通常酶催化反應都是在水溶液中進行的，而固定化酶是將水溶性酶用物理或化學方法處理，使之成為不溶于水的，但仍具有酶活性的狀態。系統的固定化酶技術的研究開始于20世紀50年代，德國的Grubhofer和Schleith率先將聚氨基苯乙烯樹脂重氮化，然后與淀粉酶、胃蛋白酶等結合，制成最早的固定化酶。但直到1971年第一屆國際酶工程(Enzyme Engineering)會議，這種技術才被正式命名為固定化酶技術。之后人們對固定化酶的研究取得了長足的進展，包括固定化技術、載體材料及其在生化過程和酶制劑中的應用等。

依據游離酶的理化特性和用途，酶的固定化方法可分為物理方法和化學方法。物理方法主要包括包埋法、吸附法；化學方法主要有化學交聯法和共價鍵法。當前，由于固定化酶的方法過于復雜，效率低、成本高，或使用了有毒的化學試劑而不符合食品加工所必須滿足的經濟和安全的標準，所有這些都限制了固定化脂肪酶技術在食品工業中的應用。

發明內容

針對上述現有的酶的固定化方法存在的問題，本發明提供一種脂肪酶的固定化方法，具有流程簡單，且有產品收率高、穩定性好的優點。

為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是：

一種脂肪酶的固定化方法，其中，包括如下步驟：

1)將Na2HPO4溶液和檸檬酸溶液混合均勻，得到Na₂HPO₄-檸檬酸緩沖液；

2)將液體脂肪酶溶于Na₂HPO₄-檸檬酸緩沖液中，調節pH值為7.5-8.5，得到酶緩沖溶液；

3)將載體加入酶緩沖溶液中，得到載體/脂肪酶混合液，然后將載體/脂肪酶混合液在空氣浴搖床進行固定，經過濾、洗滌、干燥，得到固定化脂肪酶。