[發明專利]一種前庭導水管擴大/Pendred綜合征致病基因SLC26A4突變檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201811647352.0
• 申請日: 2018-12-29
• 公開（公告）號: CN109536602A
• 公開（公告）日: 2019-03-29
• 發明（設計）人: 查定軍;梁鵬飛;王淑娟;李薇;安曉剛;陳俊;李瓊;邱建華
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 范巍

本發明公開了一種前庭導水管擴大/Pendred綜合征致病基因SLC26A4突變檢測試劑盒。試劑盒包括從待測樣品中提取DNA的試劑、用于擴增樣本DNA的PCR反應試劑、對PCR擴增產物進行測序的試劑；所述擴增樣本DNA的PCR反應試劑包括PCR引物。使用本發明所述試劑盒檢測患者是否存在SLC26A4基因c.1656T>G突變，從而診斷前庭導水管擴大/Pendred綜合征發生的原因，該試劑盒將有利于臨床上開展前庭導水管擴大/Pendred綜合征患者的SLC26A4突變篩查工作，為前庭導水管擴大/Pendred綜合征患者的診斷提供依據。

技術領域

本發明涉及基因檢測領域，具體涉及在臨床診斷前庭導水管擴大/Pendred綜合征中應用的SLC26A4基因單個突變位點c.1656T>G(p.S552R)分型檢測試劑盒。

背景技術

1997年Everett首先報道Pendred綜合征的致病基因為SLC26A4基因。Pendred綜合征表現為先天性的感音神經性耳聾，耳蝸畸形(前庭導水管擴大或Mondini畸形)合并甲狀腺腫大，它的遺傳方式為常染色體隱性遺傳。1999年Usami在6個單純前庭導水管擴大家庭(無甲狀腺腫，無Mondini畸形)內進行SLC26A4基因全序列篩查，發現有4名患者為SLC26A4基因純合或復合雜合突變，認為SLC26A4基因同樣可以導致單純前庭導水管擴大。2001年Campbell在6個前庭導水管擴大家系和5個Mondini畸形家系中各發現5名和4名患者存在SLC26A4基因突變，認為SLC26A4基因是顳骨畸形最主要的致病原因。由此，學者普遍認為SLC26A4基因突變可以導致Pendred綜合征、單純前庭導水管擴大或者合并內耳畸形的前庭導水管擴大。前庭導水管擴大是最常見的內耳畸形。臨床表現為學語前感音神經性或混合型耳聾，有時呈波動性或漸進性。其波動性常與頭部外傷、感冒有關，可伴有或不伴有眩暈。

SLC26A4基因mRNA全長4930bp，含有21個外顯子，開放閱讀框起始于2號外顯子，全長2343bp，編碼780個氨基酸的蛋白質Pendrin，主要分布于甲狀腺、內耳和腎臟。Pendrin相對分子量86000，具有11個跨膜區域，5個細胞外環，5個細胞內環，胞內氨基末端和胞外羧基末端。主要由疏水性氨基酸組成，屬于離子轉運體家族，研究表明其功能主要與碘/氯離子轉運有關。Yang J等學者認為，SLC26A4基因突變可引起Pendrin蛋白功能障礙，氯離子轉運障礙，導致內耳淋巴液流動異常，結果使前庭水管擴大，內淋巴管內壓上升，內耳毛細胞受損和聽神經萎縮，最終影響聽力。還有研究表明Pendrin蛋白參與協調內耳的發育，在基因水平上，它均有連接同源異形盒與轉錄因子的功能。

SLC26A4基因目前發現的突變達120多種，遍布于各個外顯子或其側翼序列；其中錯義突變占了絕大部分，此外還有剪接位點突變與框移突變。而且患者的基因型也多種多樣，可以表現為一致的純合狀態，也可以是任意兩種突變的組合，即表現為復合雜合狀態，充分體現了突變類型的個體化，也提高了發現新的突變位點的難度。

由于SLC26A4基因突變種類多樣，且在不同種族間呈現出明顯的多樣性，不同地域、種族的優勢等位基因有所不同，所以發現不同地域人種各自所特有的突變位點顯得尤為重要，但目前，尚缺乏此類針對特定人種的SLC26A4基因突變位點的報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種前庭導水管擴大/Pendred綜合征致病基因SLC26A4突變檢測試劑盒。

為達到上述目的，本發明采用了以下技術方案：

一種用于檢測SLC26A4基因c.1656T>G(p.S552R)突變的試劑盒，該試劑盒包括用于擴增DNA片段的PCR反應試劑，所述PCR反應試劑包括PCR引物，該PCR引物擴增的目標片段包含人SLC26A4基因(參考序列基因ID：5172)編碼區第1656位所對應的堿基。

優選的，所述試劑盒還包括用于從待測個體中提取PCR擴增所需的模板DNA的試劑。