[發(fā)明專利]一種全血RNA保存液及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811645228.0
• 申請日: 2018-12-29
• 公開（公告）號: CN109486904A
• 公開（公告）日: 2019-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張姝;李思韻;王思娜;鐘經(jīng)德
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州陽普醫(yī)療科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 張春水;唐京橋

本發(fā)明屬于核糖核酸技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種全血RNA保存液及其應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種全血RNA保存液，包括：核酸穩(wěn)定劑、螯合劑、還原劑和pH緩沖劑。實驗結(jié)果表明，在模擬保存的情況下，本發(fā)明RNA保存液可有效地保護(hù)全血RNA不被降解，保證離體血細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄水平的穩(wěn)定性，解決了全血樣本中RNA易降解、血細(xì)胞離體后基因轉(zhuǎn)錄水平不穩(wěn)定的技術(shù)問題，確保了將全血RNA用于科研實驗和臨床檢測時，其實驗和檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，對全血RNA在科研或臨床檢測時的樣本保存有重要應(yīng)用價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于核糖核酸技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種全血RNA保存液及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

核糖核酸(Ribonucleid acid,RNA)作為生命遺傳信息的載體之一，存在于細(xì)胞生物、部分病毒、類病毒中，并參與多種生命活動，因此在科研及臨床檢測的分子生物學(xué)領(lǐng)域被廣泛研究及應(yīng)用，高質(zhì)量、完整的RNA可用于各種分子生物學(xué)實驗和檢測，如核酸酶保護(hù)實驗、原癌基因表達(dá)檢測、用藥監(jiān)測等。RNA本身的單鏈結(jié)構(gòu)既不穩(wěn)定，且極易被廣泛存在并極其穩(wěn)定的核糖核酸酶(RNase)降解，另外，離體血液細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)錄水平可能會迅速發(fā)生改變，而RNA的完整性和基因轉(zhuǎn)錄水平的穩(wěn)定性會對檢測結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性產(chǎn)生重要影響。

目前市場上有PAXgene品牌的血液RNA采血管對全血RNA有一定的保存效果，但其RNA提取產(chǎn)量較低，且需要配合專用試劑盒才可提取，因而應(yīng)用有限。一般采用EDTA抗凝血作為提取全血RNA的樣品，無法有效抑制血液中豐富的RNase活性，采集樣品后需立即提取RNA或者對樣品的儲存溫度和時間都有較嚴(yán)格的要求，因而限制了全血RNA檢測的應(yīng)用，且EDTA抗凝血無法保證離體血液細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄水平的穩(wěn)定性，嚴(yán)重影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種全血RNA保存液及其應(yīng)用，用于解決全血樣本中RNA易降解、血細(xì)胞離體后基因轉(zhuǎn)錄水平不穩(wěn)定的技術(shù)問題。

本發(fā)明的具體技術(shù)方案如下：

一種全血RNA保存液，包括：核酸穩(wěn)定劑、螯合劑、還原劑和pH緩沖劑。

優(yōu)選的，在所述RNA保存液中，所述核酸穩(wěn)定劑的濃度為0.001M～4M、所述螯合劑的濃度為10mM～100mM、所述還原劑的濃度為10mM～150mM、所述pH緩沖劑的濃度為20mM～100mM。

優(yōu)選的，在所述RNA保存液中，所述核酸穩(wěn)定劑的濃度為0.1M～3M、所述螯合劑的濃度為20mM～80mM、所述還原劑的濃度為20mM～100mM、所述pH緩沖劑的濃度為30mM～50mM。

更優(yōu)選的，在所述RNA保存液中，所述核酸穩(wěn)定劑的濃度為0.2M、所述螯合劑的濃度為35mM、所述還原劑的濃度為20mM、所述pH緩沖劑的濃度為50mM。

優(yōu)選的，所述RNA保存液的pH為3.0～9.0。

更優(yōu)選的，RNA保存液的pH為3.5～7.0。

優(yōu)選的，所述核酸穩(wěn)定劑包括離液鹽和/或表面活性劑。

優(yōu)選的，所述螯合劑為乙二胺四乙酸二鉀和/或乙二胺四乙酸三鉀。

優(yōu)選的，所述還原劑包括β-巰基乙醇、二硫蘇糖醇、硫代硫酸鈉和三(2-羧乙基)膦中的一種或多種。

優(yōu)選的，所述pH緩沖劑選自檸檬酸-檸檬酸鈉、Tris-HCl或磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉。

優(yōu)選的，所述離液鹽包括異硫氰酸胍、鹽酸胍、尿素和氯化鋰中的一種或多種。

優(yōu)選的，所述表面活性劑包括十二烷基二甲基芐基氯化銨、十二烷基硫酸鈉和Triton X-100中的一種或多種。

本發(fā)明還提供了上述技術(shù)方案所述全血RNA保存液在保存全血RNA中的應(yīng)用。