[發明專利]一種檢測肺炎衣原體的試劑盒

在審

• 申請號: 201811643271.3
• 申請日: 2018-12-29
• 公開（公告）號: CN111378769A
• 公開（公告）日: 2020-07-07
• 發明（設計）人: 遲大利;吳大治;夏懿
• 申請（專利權）人: 上海星耀醫學科技發展有限公司;上海復星長征醫學科學有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了肺炎衣原體的基于LAMP技術的檢測試劑盒。LAMP引物根據肺炎衣原體的特異保守序列設計，每組引物包含4條寡核苷酸，通過LAMP反應體系利用恒溫擴增儀對肺炎衣原體進行熒光鑒定檢測。本發明為肺炎衣原體測提供了一個新的技術平臺，適宜在基層單位、現場監測和床旁檢測中推廣應用。

技術領域

本發明屬于以等溫擴增為代表的分子生物學檢測方法在肺炎衣原體檢測方面的應用，即肺炎衣原體的環介導等溫擴增檢測方法和試劑盒。

背景技術

肺炎衣原體（Chlamydia pneumoniae，Cpn）染色體有DNA和RNA兩種核酸，根據遺傳性和生物學特性，肺炎衣原體可分為TWAR、考拉和馬3個生物變種。人類肺炎衣原體感染呈世界性流行，不分地域、不受種族和年齡限制。肺炎衣原體TWAR株對呼吸系統有致病性，最突出的是引起急性或慢性支氣管炎和肺炎。此外，還與急性或慢性呼吸道疾病如中耳炎、肺阻塞性疾病以及動脈粥樣硬化、哮喘、結節性紅斑、反應性呼吸道疾病、Reiter氏綜合征、肉樣瘤病等有關。

近年來，分子生物學方法不斷被應用到呼吸道病原體的快速檢測中，呼吸道病原體的實驗室診斷方法取得了很大的進展，核酸檢測已經成為了呼吸道病原體實驗室診斷的發展方向。相對于傳統的實驗室檢測法，分子診斷技術具有無可比擬的檢測速度、特異性和靈敏度，已成為實驗室診斷的新標準。

其中，環介導等溫擴增法具有檢測靈敏度高、結果判斷直觀，且不需要熒光定量PCR儀等價格昂貴的設備等優點，具有廣泛應用前景。

環介導等溫擴增技術(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)是一種新型等溫核酸擴增技術，具有快速、簡便、經濟、靈敏等優點，目前已被廣泛應用于核酸快速檢測領域。LAMP的原理是針對靶基因上6個區域設計2對引物(FIP[F1c+F2]、BIP[B2+B1c]、F3、B3)，在鏈置換型DNA聚合酶的作用下，于等溫條件在短時間內（15~90min）進行核酸擴增。

在反應液中添加熒光物質SYBR GREEN，利用恒溫擴增儀檢測熒光曲線，有熒光曲線表示待測樣品中存在肺炎衣原體（陽性），無擴增曲線表示待測樣品中無肺炎衣原體（陰性）。與傳統PCR相比，LAMP具有操作簡便、靈敏度高、特異性強、結果判定簡單、成本低廉等特點。LAMP檢測靈敏度至少比普通PCR 高出2個數量級。此外，等溫擴增僅需一個水浴鍋或恒溫裝置，對設備的要求簡單，其操作過程耗時較短，可在1小時內完成。通過SYBR GREEN等熒光染料對PCR擴增產物的顯色，LAMP反應結果的檢測可通過等溫擴增儀進行可視化呈現，是一種高效、簡便、快捷、高通量的檢測方法。

因此，開發一種針對肺炎衣原體的環介導等溫擴增試劑盒具有重要意義。

發明內容

本發明的目的在于：提供一種用于肺炎衣原體核酸檢測的方法；另一目的在于提供一種用于該方法的試劑盒。

1. 肺炎衣原體的LAMP檢測專用引物

根據肺炎衣原體基因組特異性保守序列，應用在線引物設計軟件Primer ExplorerV5，上傳靶序列后，即可初步得到多組引物序列。