[發明專利]一種抗中性粒細胞髓過氧化物酶抗原檢測方法在審
| 申請號： | 201811643155.1 | 申請日： | 2018-12-29 |
| 公開（公告）號： | CN109738633A | 公開（公告）日： | 2019-05-10 |
| 發明（設計）人： | 陸上蘇 | 申請（專利權）人： | 鎮江金太醫學檢驗實驗室有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/535 | 分類號： | G01N33/535 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 212016 江蘇省鎮*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 髓過氧化物酶 中性粒細胞 凹孔 抗原檢測 稀釋 包被緩沖液 稀釋緩沖液 包被抗原 抗原活化 酶結合物 顯色溶液 酶標板 終止劑 血清 檢測 抗原 孵育 定性 對抗 觀察 | ||
1.一種抗中性粒細胞髓過氧化物酶抗原檢測方法，包括如下步驟：
將抗中性粒細胞髓過氧化物酶抗原加入在PH=5-6.8的100mmol/L的活化液中，然后放置于40C環境中活化25分鐘以上；
用包被緩沖液稀釋包被抗原至5-20ug/ml的濃度后，將其以每孔40-100ul的量加入酶標板中，在適宜環境中孵育2小時以上，然后清洗；
向每凹孔加入用含有0.05%稀釋緩沖液稀釋的被檢血清各0.2ml，在適宜環境中孵育1-2小時，然后清洗；
向每個凹孔中加入稀釋緩沖液稀釋的酶結合物0.2ml，然后在37℃氛圍中處理0.5-1小時，然后用清洗液清洗；
向每個凹孔中加入0.15ml的顯色溶液，然后在37℃氛圍中處理10-30分鐘，然后加入終止劑觀察實驗結果。
2.根據權利要求1所述的抗中性粒細胞髓過氧化物酶抗原檢測方法，其特征在于，經經步驟c處理后的物質中先加入0.1-0.5ml的輔助溶劑后，在適宜溫度處理1-3小時后再進行步驟d的操作。
3.根據權利要求2所述的抗中性粒細胞髓過氧化物酶抗原檢測方法，其特征在于，所述輔助溶劑由以下按重量份數配比組成：酪蛋白鈉1-2份，檸檬酸鈉10-25份，慶大霉素0.1-0.3份，胱氨酸2-5份，牛血清白蛋白0.2-0.8份，0.2mol/L的KH2PO4溶液1-3份，加入適量去離子水調勻。
4.根據權利要求3所述的抗中性粒細胞髓過氧化物酶抗原檢測方法，其特征在于，所述輔助溶劑由以下按重量份數配比組成：酪蛋白鈉1份，檸檬酸鈉15份，慶大霉素0.15份，胱氨酸3份，牛血清白蛋白0.3份， 0.2mol/L的KH2PO4溶液1份，加入適量去離子水調勻。
5.根據權利要求1所述的抗中性粒細胞髓過氧化物酶抗原檢測方法，其特征在于，抗中性粒細胞髓過氧化物酶抗原可以是純化的天然抗原、重組抗原或者人工合成多肽。
6.根據權利要求1所述的抗中性粒細胞髓過氧化物酶抗原檢測方法，其特征在于，所述活化液由以下按重量份數配比組成：甘油2-6份，維他命C 1-10份，黃原膠0.2-0.8份，透明質酸鈉 0.1-0.2份。
7.根據權利要求1所述的抗中性粒細胞髓過氧化物酶抗原檢測方法，其特征在于，所述包被緩沖液選自50mM pH 9.6的碳酸鹽緩沖液、20mM pH 8.5 的Tris-HCl或者10mM pH 7.2PBS溶液。
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