[發明專利]抗球蟲飼料添加劑產品中綠原酸與咖啡酸含量的測定方法

在審

• 申請號: 201811642893.4
• 申請日: 2018-12-29
• 公開（公告）號: CN109632781A
• 公開（公告）日: 2019-04-16
• 發明（設計）人: 姚浪群;王微;劉萍;吳月嬌;董素軍
• 申請（專利權）人: 北京愛綠生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/82;G01N21/33
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

1.抗球蟲飼料添加劑產品中綠原酸與咖啡酸含量的測定方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、向抗球蟲飼料添加劑產品中加入甲醇或乙醇浸提，將提取液作為樣品溶液；

S2、向樣品溶液中加入適量甲醇或乙醇，然后加入十二烷基硫酸鈉、鐵氰化鉀和三氯化鐵，混勻，于暗處放置一段時間，向體系中加入酸性物質終止反應；

S3、用紫外分光光度計測定190～800nm處的吸光度值；

S4、分別配制不同濃度梯度的綠原酸標準品溶液和咖啡酸標準品溶液，按照步驟S2-S3進行檢測，根據標準品溶液的濃度及相應的吸光度值繪制標準曲線；

S5、根據樣品溶液的檢測結果，對照標準曲線，獲得樣品溶液中綠原酸與咖啡酸的濃度，從而計算出抗球蟲飼料添加劑產品中綠原酸的含量；

其中，所述抗球蟲飼料添加劑產品為天然植物抗球蟲飼料添加劑產品。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S1具體為：向1.0～2.0g抗球蟲飼料添加劑產品中加入70％甲醇30～60ml，加熱回流提取2～3次，每次提取1～2h，放冷過濾，合并濾液，用70％甲醇定容至50ml，作為樣品溶液。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟S1具體為：向2.0g抗球蟲飼料添加劑產品中加入70％甲醇40ml，加熱回流提取2次，每次提取1h，放冷過濾，合并濾液，用70％甲醇定容至50ml，作為樣品溶液。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S1具體為：向1.0～2.0g抗球蟲飼料添加劑產品中加入70％甲醇40ml，在超聲功率60W，頻率45HZ下超聲2次，每次30min，超聲后過濾，收集濾液，用70％甲醇定容至50ml，作為樣品溶液。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S2所述酸性物質為鹽酸。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S2具體為：向0.5～2ml樣品溶液中加入無水乙醇3～5ml，然后加入0.3％十二烷基硫酸鈉0.5～2ml、0.5％鐵氰化鉀0.2～1ml、1％三氯化鐵0.2～1ml，混勻，暗處放置3～5min，然后向體系中加入0.05～0.1mol/L鹽酸溶液至總體積25～50ml，混勻，暗處放置20～40min。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟S2具體為：向2ml樣品溶液中加入無水乙醇5ml，然后加入0.3％十二烷基硫酸鈉2ml、0.5％鐵氰化鉀1ml、1％三氯化鐵1ml，混勻，暗處放置5min，然后向體系中加入0.1mol/L鹽酸溶液至總體積25ml，混勻，暗處放置20min。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S3用紫外分光光度計測定324nm處的吸光度值。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S4中以甲醇或乙醇為溶劑分別配制綠原酸標準品溶液和咖啡酸標準品溶液。

10.根據權利要求1-9任一項所述的方法，其特征在于，綠原酸的線性檢測范圍：0.32～1.92μg/ml，最低檢測限：0.32μg/ml；咖啡酸的線性檢測范圍：0.005～0.04μg/ml，最低檢測限：0.005μg/ml。