[發明專利]一種人羊膜上皮細胞的無血清培養基

在審

• 申請號: 201811639093.7
• 申請日: 2018-12-29
• 公開（公告）號: CN109652364A
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發明（設計）人: 周海軍;吳家波
• 申請（專利權）人: 廣州和能生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 深圳市合道英聯專利事務所(普通合伙) 44309
• 代理人: 廉紅果

本發明公開了一種人羊膜上皮細胞的無血清培養基，包括上皮細胞基礎培養基和添加劑，以上皮細胞基礎培養基的體積作為基準，所述添加劑組成及其含量分別為纖連蛋白，體積比2％?5％，轉鐵蛋白，體積比為5％?10％，胰島素2?10mg/L，L?谷氨酰胺，2?4mM，腐胺，1?10mg/L，黃體酮10?15ng/mL，葡萄糖，5?25mM，脂類復合物，2?4mM，微量元素，1?5mg/L。本發明采用無血清等動物源的成分，以DMEM/F12基礎培養基以及添加劑兩大部分組成，能夠有效地避免因使用血清帶來的諸多的不利影響，無血清培養基內部添加人表皮生長因子以及適當添加促貼壁物質、促生長因子以及酶抑制劑等添加物，延長人羊膜上皮細胞在體外的壽命，有效地擴增其數量，此外，保持其干細胞和上皮細胞的特性，提高干細胞和上皮細胞的質量。

技術領域

發明涉及生物技術領域，具體為一種人羊膜上皮細胞的無血清培養基。

背景技術

干細胞移植憑借其細胞來源豐富、不易感染、免疫原性低和并發癥少等優點，已逐漸成為當今生物醫學研究的熱點。人羊膜上皮細胞是位于人胎盤羊膜上立方體柱狀緊密排列的單層細胞，表達多種胚胎干細胞表面標記，是一類具有自我更新與多向分化潛能的成體干細胞，具有不表達端粒酶、無致瘤性、免疫原性低以及安全性好等優點，因此具有廣闊的臨床應用前景。

但是，目前對于人羊膜上皮細胞體外培養過程中其增殖以及分裂速度較胚胎干細胞要慢，因此在實際的人羊膜上皮細胞體外培養過程中其增殖分化的能力較差，導致擴增數量不足，此外，傳統的對于人羊膜上皮細胞體外培養使用的培養基是含有牛血清的培養基，由于血清成分復雜易帶入外源病毒等問題易對人羊膜上皮細胞體外培養增加阻礙，此外，市面上存在的無血清培養基無法很好地適應人羊膜上皮細胞體外擴增時的特點，進而無法明確培養物的成分以及促進人羊膜上皮細胞的順利分化，為此，我們提出了一種人羊膜上皮細胞的無血清培養基。

發明內容

發明的目的在于提供一種人羊膜上皮細胞的無血清培養基，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，發明提供如下技術方案：一種人羊膜上皮細胞的無血清培養基，其特征在于：以上皮細胞基礎培養基的體積作為基準，所述添加劑組成及其含量分別為纖連蛋白，體積比2％-5％，轉鐵蛋白，體積比為5％-10％，胰島素2-10mg/L，L-谷氨酰胺，2-4mM，腐胺，1-10mg/L，黃體酮10-15ng/mL，葡萄糖，5-25mM，脂類復合物，2-4mM，微量元素，1-5mg/L。

優選的，所述上皮細胞基礎培養基為DMEM/F12(1：1，V/V)基礎培養基。

優選的，所述無血清培養基的PH值控制在6.5-7.5之間。

優選的，所述無血清培養基另添加有人表皮生長因子(EGF)1-10ng/mL。

優選的，所述無血清培養基另外添加2-4mg/L的大豆胰酶作為酶抑制劑。

優選的，所述上皮細胞基礎培養基和添加劑按照特定體積比或含量混合在人羊膜上皮細胞培養之前構成人羊膜上皮細胞無血清培養體系。

優選的，所述人表皮生長因子(EGF)為人羊膜上皮細胞培養過程中加入人羊膜上皮細胞無血清培養體系內。

與現有技術相比，發明的有益效果是：

1、該種人羊膜上皮細胞的無血清培養基，采用無血清等動物源的成分，以DMEM/F12基礎培養基以及添加劑兩大部分組成，基礎培養基含有各種營養物質能夠很好的供人羊膜上皮細胞體外擴增過程中一系列的生命活動，同時，能夠有效地避免因使用血清帶來的諸多的不利影響。