[發明專利]一種毛細管電泳的在線富集方法

有效

• 申請號: 201811635477.1
• 申請日: 2018-12-29
• 公開（公告）號: CN109709198B
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發明（設計）人: 曹君;王秋燕;董雪漫;胡雨涵;楊娟;董新;張芹
• 申請（專利權）人: 杭州師范大學
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447;G01N1/40
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏

本發明涉及天然藥物提取技術領域，針對目前碘化物在線富集可持續操作時間有限的問題，公開了一種毛細管電泳的在線富集方法。該方法包括樣品的處理和利用在線固相萃取?毛細管電泳程序進行富集。該方法首次采用離子液體作為洗脫溶劑應用在在線固相萃取毛細管電泳的富集的技術中，并且應用在天然產物提取富集領域。經過富集方法處理之后，儀器的靈敏度大大提高，每種樣品的檢測限均比傳統方法大大降低。本發明采用的離子液體，以及固相萃取中所用的吸附劑，大大減少了有機溶劑的使用，顯著降低了提取過程中的污染與危害，改善了提取效果與提取效率，并且該方法簡單，應用范圍廣泛，易于使用，富集效果顯著。

技術領域

本發明涉及天然藥物提取技術領域，尤其涉及一種毛細管電泳的在線富集方法。

背景技術

為了提高毛細管電泳的靈敏性，一種通過在線固相萃取-毛細管電泳連用的方法被提出。在這種方法中，將由實驗室自制的小段裸熔石英毛細管內含有固相萃取吸附劑的分析物濃縮器插入毛細管的入口部分，將分析的化合物加載到固相萃取的吸附劑上，然后進行分析物的洗脫和分離。為了最大限度地減少因使用篩板構建分析物濃縮器時造成的電滲流干擾、電流不穩定和遷移時間的不可再現性問題，這種構建裝置已發展為不使用兩塊篩板來固定吸附劑材料，而是要求進行固相萃取吸附劑的粒徑比兩端的毛細管的直徑大。這種改善后的分析方法克服了分析復雜樣品基質時毛細管電泳的低靈敏度問題，此外，在高壓條件下的大樣品加載也有效地避免了分析物的損失。整個在線固相萃取過程實現了一個消耗少量試劑的集成自動化模型，目前，這種富集方法已用于分析酸性抗生素，生物堿和生物樣品等，而幾乎沒有用這種方法分析含有特定官能團的化合物。此外，一些傳統的有機溶劑通常用于洗脫加載在集中器上的分析物，然而，由于它具有高揮發性和低粘度，可持續操作時間有限，導致少量分析物被提取，因此方法靈敏度低，因此開發一種新的綠色高效洗脫溶劑是有意義的。

離子液體由離子組成，與傳統有機溶劑相比，已被廣泛宣傳為“綠色溶劑”，離子液體具有導電性高，電化學窗口大的優點，對許多無機和有機物質具有良好的溶解性及化學穩定性，能夠很好的避免揮發性有機化合物的環境污染問題，且可循環使用。這些優異的性能使得離子液體在化學合成，萃取方法和電化學反應等方面得到大量得應用。在分析化學中，一些萃取技術如微萃取，微波輔助萃取等有使用離子液體作為萃取溶劑，在分離技術方面，氣相色譜，液相色譜和毛細管電泳中也有應用離子液體的報告。在在線固相萃取-毛細管電泳連用中的應用離子液體還尚未報道，這在提高毛細管電泳的靈敏度，增強富集效果等方面有很大的潛力。

有機碘是人體碘化物的重要形式。它對于甲狀腺激素的合成和神經系統的發育是必不可少的。此外，它在維持人體甲狀腺的正常功能，代謝平衡和細胞增殖和分化中也起著重要作用。碘化物濃度相對較低，物理化學性質極為相似，使得不同碘化物的分析有一定的難度。目前，瞬態等速電泳，電感耦合等離子體質譜分光光度法，原子吸收光譜被用于測定碘化物。這些分析方法存在有一些限制：原子吸收光譜和色譜分析方法需要昂貴的設備，而且樣品的分析需要很長時間。碘化物富集方法，如，使用在線樣品處理柱測定碘化物及表面活性劑涂覆的多壁碳納米管作為毛細管電泳檢測碘化物的假固定相等，這些富集技術相對復雜且多靈敏度低。使用在線固相萃取毛細管電泳的方法測量碘化物3,5-二碘-L-甲狀腺素(T₂)，3,5-二碘-L-酪氨酸(MIT)和L-酪氨酸(DIT)(化學結構式見圖1)富集技術尚未使用。

中國專利申請公開號為CN102121919A的專利，公開了一種靈敏檢測多種樣品中三聚氰胺的毛細管電泳在線富集方法。該方法通過兩種在線富集技術(陽離子耗盡進樣和膠束掃集)聯用測定三聚氰胺，使三聚氰胺的富集靈敏度與普通的區帶毛細管電泳相比提高了2600倍，檢出限降低為1.8μg/kg。該方法采用低電滲流下的電動進樣，對進入毛細管中的樣品有選擇性，受樣品基質影響小，不需要如液相色譜等方法中復雜的樣品預處理過程，適用于多種樣品中三聚氰胺的檢測；靈敏度高，比已有的液相色譜、熒光光譜法的檢出限降低兩到三個數量級，使用的空心毛細管柱價格便宜，分析成本低。然而，該方法可持續操作時間有限，浪費水資源。

發明內容