[發(fā)明專利]固定化酶組合物及其制備方法和用途在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201811635219.3 | 申請(qǐng)日： | 2018-12-29 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN111378643A | 公開(kāi)（公告）日： | 2020-07-07 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 李萌萌;鄭妍;付官文 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 豐益（上海）生物技術(shù)研發(fā)中心有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C12N11/14 | 分類號(hào)： | C12N11/14;C12P7/64 |
| 代理公司： | 北京英賽嘉華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11204 | 代理人： | 王達(dá)佐;洪欣 |
| 地址： | 200137 上海市浦*** | 國(guó)省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 固定 組合 及其 制備 方法 用途 | ||
本申請(qǐng)?zhí)峁┝斯潭ɑ附M合物及其制備方法和用途，該固定化酶組合物包含脂肪酶、載體和植物蛋白，所述植物蛋白的分子量?jī)?yōu)選為約100kDa?約400kDa。本申請(qǐng)的固定化酶組合物具有較強(qiáng)的Sn?1,3專一性，耐熱性好，適合高溫酯交換反應(yīng)。
技術(shù)領(lǐng)域
本申請(qǐng)屬于酶工程性領(lǐng)域。具體而言，本申請(qǐng)涉及固定化酶組合物及其制備方法和用途。
背景技術(shù)
脂肪酶是一種工業(yè)中常用的生物催化劑，廣泛存在于動(dòng)植物和微生物體內(nèi)。脂肪酶按其底物特異性可分為五類：無(wú)特異性脂肪酶、脂肪酸特異性脂肪酶、位置特異性脂肪酶、立體特異性脂肪酶和底物特異性脂肪酶。具有位置特異性的脂肪酶優(yōu)先水解甘油三酯的Sn-1和Sn-3位，因此也被稱為Sn-1,3專一性脂肪酶。游離的脂肪酶雖然用途廣泛，催化技術(shù)比較成熟，但其容易受到pH、溫度等條件的影響而不穩(wěn)定，分離困難，大多數(shù)情況下只能使用一次，不是工業(yè)應(yīng)用中理想的催化劑。
通常將Sn-1,3專一性脂肪酶進(jìn)行固定化再進(jìn)行酯交換反應(yīng)，常用的載體有離子交換樹(shù)脂、大孔吸附樹(shù)脂等大顆粒載體。然而采用這類載體的固定化脂肪酶成本高、設(shè)備投入大。目前市售的Sn-1,3專一性固定化脂肪酶品種少、價(jià)格昂貴、大多采用此類載體，并且不適合用于高于60℃的反應(yīng)。
專利CN1806044B描述了一種Sn-1,3專一性脂肪酶粉末的制備方法，該方法通過(guò)噴霧干燥得到固定化酶，酶液在噴霧干燥前需要經(jīng)過(guò)超濾處理并調(diào)節(jié)pH值，制備過(guò)程復(fù)雜。經(jīng)噴霧干燥后還需用油脂浸漬或浸潤(rùn)才能得到最終的固定化酶產(chǎn)品，增加了生產(chǎn)成本。專利CN101675159A描述了一種無(wú)載體Sn-1,3專一性脂肪酶粉末的制備方法，該法所制備的脂肪酶產(chǎn)品顆粒較細(xì)、密度小、流動(dòng)性差，在實(shí)際應(yīng)用中很難與底物分離。而且該方法噴霧干燥入口溫度控制非常低，大大降低了生產(chǎn)效率。專利CN103468668B描述了一種采用白炭黑為載體制備粉末脂肪酶的方法，采用該方法所制備的粉末脂肪酶喪失了Sn-1,3專一性。
目前還沒(méi)有關(guān)于Sn-1,3專一性高并且耐熱性好的固定化Sn-1,3專一性脂肪酶的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容
第一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝斯潭ɑ附M合物，其包含脂肪酶、載體和植物蛋白。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述植物蛋白的分子量為約100kDa-約400kDa，優(yōu)選為約120kDa-約360kDa。
第二方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝说谝环矫嫠龅墓潭ɑ附M合物的制備方法，其包括：將脂肪酶、載體和植物蛋白混合，得到包含脂肪酶、載體和植物蛋白的混合物；以及將上述混合物進(jìn)行干燥。
在一些實(shí)施方案中，上述制備方法包括在入口溫度約140℃-約200℃、出口溫度約75℃-約120℃的條件下將包含脂肪酶、載體和植物蛋白的混合物進(jìn)行噴霧干燥。
在上述任一方面的一些實(shí)施方案中，所述脂肪酶為Sn-1,3專一性脂肪酶。
在上述任一方面的一些實(shí)施方案中，所述脂肪酶為來(lái)自動(dòng)物、植物或微生物的脂肪酶。在具體的實(shí)施方案中，所述脂肪酶來(lái)自選自以下的微生物：疏棉狀嗜熱絲孢菌(Thermomyces lanuginosus)、米黑毛霉(Mucor miehei)、螢光假單胞菌(Pseudomonasfluorescens)、黑曲霉(Aspergillus niger)、米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)、解脂假絲酵母(Candida lipolytica)、根霉(Rhizopus sp.)或以上微生物的基因改造菌種。
在上述任一方面的一些實(shí)施方案中，所述載體為非極性載體，例如疏水載體。在具體的實(shí)施方案中，上述載體選自二氧化硅、滑石粉、高嶺土、硅藻土、石墨、炭黑、氧化鋁粉、玻璃粉、石棉粉、云母粉、石英粉、碳纖維、粉末狀軟木、金剛砂或其任意組合。
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