[發明專利]一種通用型CAR-T細胞及其制備方法和用途有效
| 申請號： | 201811633907.6 | 申請日： | 2018-12-29 |
| 公開（公告）號： | CN109722437B | 公開（公告）日： | 2020-01-07 |
| 發明（設計）人： | 李光超;羅敏;莫文俊;周兆;邱玉信;丁雯 | 申請（專利權）人： | 廣州百暨基因科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N15/867;C12N15/90;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00;A61P35/02;A61P37/02 |
| 代理公司： | 11111 北京市萬慧達律師事務所 | 代理人： | 謝敏楠;張孟迪 |
| 地址： | 510000 廣東省廣州市廣州*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 通用型 制備 組織相容性復合體 免疫抑制分子 嵌合抗原 相關基因 敲除 細胞 | ||
1.一種sgRNA，所述的sgRNA是SEQ ID NO:11所示的序列。
2.根據權利要求1所述sgRNA，所述sgRNA靶向PD1基因。
3.含有權利要求1所述sgRNA的多位點編輯的PTG(Polycistronic tRNA-gRNA)，所述的PTG含有SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:11所示的序列。
4.根據權利要求3所述PTG(Polycistronic tRNA-gRNA)，所述的PTG含有SEQ ID NO:14所示的序列。
5.根據權利要求3所述PTG(Polycistronic tRNA-gRNA)，所述的PTG還含有SEQ ID NO:6所示的序列。
6.根據權利要求5所述PTG(Polycistronic tRNA-gRNA)，所述的PTG含有SEQ ID NO:15所示的序列。
7.包含權利要求1或2所述的sgRNA或權利要求3-6任一所述的PTG的載體。
8.根據權利要求7所述載體，所述的載體選自逆轉錄病毒、慢病毒或仙臺病毒。
9.根據權利要求8所述載體，所述的載體選自慢病毒。
10.包含權利要求1-2任一所述的sgRNA、或者權利要求3-6任一所述PTG(Polycistronic tRNA-gRNA)、或者權利要求7-9任一所述載體的試劑盒。
11.權利要求1-2任一所述的sgRNA、或者權利要求3-6任一所述PTG(PolycistronictRNA-gRNA)、或者權利要求7-9任一所述載體、或者權利要求10所述試劑盒，在構建通用型CAR-T細胞中的應用。
12.根據權利要求11所述應用，所述的通用型CAR-T細胞敲除PD1基因，以及TCR基因。
13.根據權利要求12所述應用，所述的通用型CAR-T細胞同時敲除TCR，B2M和PD1基因。
14.利用權利要求1-2任一所述的sgRNA、或者權利要求3-6任一所述PTG(Polycistronic tRNA-gRNA)、或者權利要求7-9任一所述載體、或者權利要求10所述試劑盒制備的細胞。
15.一種CAR-T細胞，所述的細胞采用SEQ ID NO:15所示的序列敲除TCR 、B2M和PD1基因。
16.根據權利要求15所述的CAR-T細胞，所述CAR靶向CD19。
17.根據權利要求15所述的CAR-T細胞，所述的CAR具有SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列、或者SEQ ID NO:17所示的核酸序列。
18.權利要求15-17任一所述的CAR-T細胞制備方法，其包括以下步驟：
1)得到活化的T細胞；
2)用編碼靶向CD19的CAR的慢病毒載體來轉染步驟1)的T細胞，獲得靶向CD19的CAR-T細胞；所述靶向CD19的CAR具有SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列；
3)將步驟2)獲得的CAR-T細胞采用SEQ ID NO:15所示的序列進行PD1基因， TCR和B2M基因的敲除；
其中，步驟2）和3）順序可互換或同時進行。
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