[發明專利]PD-1抗體檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201811633350.6
• 申請日: 2018-12-29
• 公開（公告）號: CN111381041A
• 公開（公告）日: 2020-07-07
• 發明（設計）人: 金華君;張亞軍;宋姍姍;黃晨;朱夢玲;錢其軍
• 申請（專利權）人: 上海細胞治療集團有限公司;上海細胞治療研究院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 韋東

本發明提供了一種PD?1抗體檢測試劑盒，其包括PD?1抗原和第二抗體，所述試劑盒以“支持物?PD?1抗原?PD?1抗體?第二抗體?標記物”形式完成檢測，優選地，所述PD?1抗體包括IgG4Fc。)本發明提供的PD?1抗體檢測試劑盒檢測特異性強，靈敏度高，穩定性好。能有效的捕獲細胞分泌的PD?1抗體，實現對細胞分泌的PD?1抗體的有效檢測。

技術領域

本發明涉及分子生物學檢測領域，具體而言，涉及一種PD-1抗體檢測試劑盒。

背景技術

程序性死亡分子1(programmed death-1,PD-1)，也稱CD279，是一種分子量在50-55kD的跨膜糖蛋白，主要表達與激活的T淋巴細胞、B淋巴細胞、單核細胞等免疫細胞表面，在健康狀態下，其正常功能是下調不需要的或過度的免疫反應，包括自身免疫反應。PD-1是免疫球蛋白(Ig)超家族成員，現已證實PD-1與其配體(PD-L1和/或PD-L2)結合時，可負性調節抗原受體信號。作為T細胞的負性調控因子，PD-1與其配體PD-L1/PD-L2一同參與T細胞免疫過程。已有大量研究證實，PD-1在體內炎癥和腫瘤免疫過程中發揮重要作用。PD-1/PD-L1調節軸在人體T細胞活化控制與機體免疫耐受維持中發揮關鍵作用，因此也被腫瘤細胞以及慢性病毒感染中所利用。雖然正常的器官僅能少量表達PD-1，但已有研究證實各種腫瘤細胞可大量表達這種T細胞的抑制劑。PD-1/PD-L1調節軸已被證實促進T細胞耗竭，腫瘤或病毒誘導的PD-1/PD-L1信號通路也可通過多種機制來實現宿主免疫監視的逃逸，包括促進T細胞失活、衰竭、反應遲鈍和細胞凋亡，誘導Treg細胞擴增，以及增強腫瘤內在性抵抗殺傷和凋亡的能力。通過癌細胞介導的PD-1和PD-L1相互作用導致腫瘤浸潤淋巴細胞減少，T細胞增殖抑制，并增加免疫逃逸(Topalian SL等，Cancer Cell，2015)?，F已發現腫瘤細胞中PD-L1的高表達(PD-L2的水平較低)與各種腫瘤的不良預后和生存相關，包括腎細胞癌、胰腺癌、肝細胞癌、卵巢癌和非小細胞肺癌。此外，研究還發現PD-1可調節黑色素瘤患者體內腫瘤特異性T細胞的擴增。這表明PD-1/PD-L1通路在腫瘤侵襲中起到一個重要的作用，因而是一個備受矚目的治療干預靶點。

目前，有5種針對PD-1/PD-L1的抗體已獲得了美國食品和藥物管理局批準，分別為抗PD-1抗體(Pembrolizumab和Nivolumab)、抗PD-L1抗體(Atezolizumab，Avelumab及Durvalumab)。但PD-1抗體在臨床應用中仍然存在一些不可避免的問題。一方面由于PD-1單抗是靜脈注射全身用藥，大多數接受PD-1抗體阻斷治療的患者都會出現不同程度的藥物毒副作用。另一方面PD-1單抗的生產涉及復雜的生產制備與純化工藝，成本高，導致治療費用昂貴。

近年來將嵌合抗原受體T細胞(chimeric antigen receptor T cell,CAR-T)治療技術與免疫檢查點的阻斷聯用，如與PD-1抗體的聯用成為越來越受關注的一種治療手段。但PD-1抗體在臨床應用中仍然存在一些不可避免的問題。一方面由于PD-1單抗是靜脈注射全身用藥，大多數接受PD-1抗體阻斷治療的患者都會出現不同程度的藥物毒副作用。并且大分子抗體對實體瘤的穿透力不足，全身用藥具有較大的毒副作用，且藥物成本很高。分泌免疫檢查點抗體的CAR-T細胞，如分泌PD-1抗體的CAR-T細胞，成為克服上述治療方案缺陷的一種選擇。對于自表達PD-1抗體的免疫效應細胞如CAR-T細胞，其自身的PD-1抗體的表達水平對腫瘤殺傷的效果至關重要。因此目前仍然需要有效的檢測手段檢測PD-1抗體的表達。

發明內容

本發明的所要解決的技術問題是為了解決目前需要PD-1抗體表達水平的檢測方法，提供了一種PD-1抗體檢測試劑盒，選用PD-1抗原蛋白和第二抗體進行檢測，檢測特異性強，靈敏度高，穩定性好。

為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：