[發(fā)明專利]一種雞白痢沙門氏菌檢測(cè)試劑盒及其使用方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811631747.1
• 申請(qǐng)日: 2018-12-29
• 公開（公告）號(hào): CN109652569B
• 公開（公告）日: 2021-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 白林含;黃非
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/689
• 分類號(hào): C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/10;C12N15/11
• 代理公司: 成都高遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

本發(fā)明提供了一種雞白痢沙門氏菌檢測(cè)試劑盒，它包含：雞白痢沙門氏菌特異引物、PCR緩沖液、PCR enhancer、dNTP、DNA聚合酶Tfl和DNA聚合酶KOD；所述雞白痢沙門氏菌特異引物的序列如SEQ ID NO.11?12所示；所述PCR緩沖液含有200?260摩爾份的Tris?HCl、4?8摩爾份的MgCl₂、50?120摩爾份的(NH4)₂SO₄、90?110摩爾份的KCl和1?3體積份Triton X?100；當(dāng)所述KCl的量90?110mmol時(shí)，所述Triton X?100的量為1?3ml。本發(fā)明還提供了對(duì)應(yīng)的使用方法，對(duì)應(yīng)的聚合酶Tfl和DNA聚合酶KOD的用量比例為(1?30):1。本發(fā)明能特異、靈敏地檢測(cè)雞白痢沙門氏菌以及其他沙門氏菌，在禽類疾病防控上具有良好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細(xì)菌檢測(cè)領(lǐng)域，尤其涉及一種雞白痢沙門氏菌檢測(cè)試劑盒和雞白痢沙門氏菌的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

沙門氏菌是常見的重要人獸共患病原菌，根據(jù)沙門菌對(duì)不同宿主的侵襲力差異可以分為廣嗜性沙門氏菌和宿主專嗜性特異性沙門氏菌。雞是沙門氏菌最主要的宿主，雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌僅感染雞和火雞，具有高度宿主適應(yīng)性和宿主專嗜性，可以引起雛雞急性敗血癥，導(dǎo)致很高的發(fā)病率和病死率；雞白痢是由雞白痢沙門氏菌血清型感染雞群引起的，主要是存在于卵巢、睪丸、肝臟等器官，可由感染的父母代雞傳染給雛雞。2周以下的雛雞發(fā)病后死亡率可達(dá)40％-70％，受感染的雛雞在4-7d死亡，急性時(shí)可在1-3d死亡。控制雞白痢沙門氏菌病原傳播最有效的措施是嚴(yán)格管理結(jié)合根除計(jì)劃。因此，快速鑒定和清除感染的父母代雞群至關(guān)重要。對(duì)病原菌及時(shí)、準(zhǔn)確地檢測(cè)和診斷是雞場(chǎng)有效防治與凈化沙門氏菌的重要手段。

國(guó)內(nèi)外針對(duì)沙門氏菌屬已建立的單重及多重PCR方法，多用于檢測(cè)菌株的血清型、毒力因子或耐藥基因，而針對(duì)沙門氏菌屬中的雞白痢沙門氏菌的快速檢測(cè)和診斷手段報(bào)道較少。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種雞白痢沙門氏菌檢測(cè)試劑盒，它包含：雞白痢沙門氏菌特異引物、PCR緩沖液、PCR enhancer、dNTP、DNA聚合酶Tfl和DNA聚合酶KOD；

所述雞白痢沙門氏菌特異引物的序列如SEQ ID NO.11-12所示；

所述PCR緩沖液含有200-260摩爾份的Tris-HCl、4-8摩爾份的MgCl₂、50-120摩爾份的(NH4)₂SO₄、90-110摩爾份的KCl和1-3體積份Triton X-100；當(dāng)所述KCl的量90-110mmol時(shí)，所述Triton X-100的量為1-3ml；

所述PCR enhancer含有2500-2800摩爾份甜菜堿、6-7.5摩爾份二硫蘇糖醇、65-70體積份的DMSO和50-60質(zhì)量份的BSA；當(dāng)所述甜菜堿為2.5-2.8mol時(shí)，二硫蘇糖醇為6-7.5mmol、DMSO為65-70ml、BSA為50-60mg。

進(jìn)一步地，所述PCR緩沖液含有240摩爾份的Tris-HCl、4摩爾份的MgCl₂、110摩爾份的(NH4)₂SO₄、100摩爾份的KCl和2體積份Triton X-100；當(dāng)所述KCl的量100mmol時(shí)，所述Triton X-100的量為2ml。

進(jìn)一步地，所述PCR緩沖液是2倍濃度的緩沖液，其中含有：Tris-HCl 240mM、MgCl₂4mM、(NH₄)₂SO₄ 110mM、KCl 100mM、Triton X-100 0.2％(v)。