[發明專利]一種卵黃抗體的脫脂方法

在審

• 申請號: 201811631680.1
• 申請日: 2018-12-28
• 公開（公告）號: CN111378031A
• 公開（公告）日: 2020-07-07
• 發明（設計）人: 王耀;劉文進
• 申請（專利權）人: 埃格生物科技（常州）有限公司
• 主分類號: C07K16/02
• 分類號: C07K16/02
• 代理公司: 南京勤行知識產權代理事務所(普通合伙) 32397
• 代理人: 呂波

本發明公開了一種卵黃抗體的脫脂方法，屬于體外診斷試劑抗體原料領域。本發明收集合格的雞蛋卵黃，對雞蛋卵黃稀釋及酸化脫脂后，再通過加入氣相二氧化硅對酸化卵黃液進行徹底脫脂，使用這種方法脫脂程度完全，卵黃抗體品質高，適合工業大規模生產，本發明具有方法簡單，易于操作，工藝程序簡單，產品安全性高，不會造成環境化學試劑污染。

技術領域

本發明涉及體外診斷試劑抗體原料領域，特別是一種卵黃抗體的脫脂方法。

背景技術

雞卵黃抗體是存在于卵黃中的免疫球蛋白，它是由母雞血清中的免疫球蛋白轉移而來。卵黃抗體可以應用于臨床疾病的治療，如雞傳染性法氏囊病、新城疫、鴨瘟、等等，在臨床實踐中，卵黃抗體的預防和治療效果非常理想，同時卵黃抗體的制造工藝簡單價廉，在養禽業生產中的用量很大，發揮十分重要的作用。

卵黃中35％左右的組分為脂類，實際生產應用中，卵黃抗體的純化過程就是逐步去除脂類，最后獲得高純度的IgY的過程。在卵黃抗體應用于臨床診斷試劑的應用中，對脂質殘留要求極高，脫脂不完全會對后續應用產生巨大干擾，因此，脫脂程度是衡量診斷用卵黃抗體品質的重要指標。傳統的脫脂方法有凍融法，聚乙二醇法，氯仿法，鹽析法等，這些方法存在有的不適合工業化生產，有的對環境污染大，有的回收率低，因此需要一種方法用于適用工業化生產的經濟環保卵黃抗體完全脫脂技術，去除卵黃抗體中的殘留脂質。

發明內容

本發明需要解決的技術問題是去除卵黃抗體中的殘留脂質，實現卵黃產品的完全脫脂。

為解決上述技術問題，本發明所采取的方案是：一種卵黃抗體的脫脂方法，具體步驟如下：

第一步：強化免疫，用臨床診斷指標免疫原，按照特定程序免疫雞，雞所產雞蛋蓄積特定卵黃抗體；

第二步：效價檢測，對雞蛋卵黃抗體效價檢測，收集合格所產雞蛋卵黃；

第三步：酸化，雞蛋卵黃用純化水稀釋、酸化，脫除大部分脂質；

第四步：脫脂，用脫脂技術徹底去除殘留脂質。

優選的，第一步免疫雞的強化方法為：每間隔7～20天進行強化免疫，按照抗原與佐劑等體積混合，多點注射雞胸肌或翼下肌肉 0.5～1.5ml，每次抗原劑量為10～1000ug/只。

優選的，第一步中所述佐劑為弗氏完全佐劑、弗氏不完全佐劑、天然來源佐劑、油乳佐劑、細胞因子佐劑、微生物佐劑、核酸佐劑、納米佐劑等。

優選的，第二步雞蛋卵黃抗體效價檢測方法為:雞蛋卵黃液用 0.85％生理鹽水作梯度稀釋，在雞蛋卵黃檢測效價超過1：64，收集所產雞蛋，分離雞蛋卵黃。

優選的，第二步中梯度稀釋為1:2，1:4，1:8，1:16，1:32，1:64， 1:128，1:256。

優選的，第三步雞蛋卵黃稀釋與酸化方法為：雞蛋卵黃與純化水為1:5～1:9進行稀釋，調節pH至4.5～5.5進行酸化，充分攪拌混合均勻，4℃靜置過夜，分離上清液，取上清液即為酸化卵黃液。

優選的，第四步脫脂技術為：酸化卵黃液加入質量濃度為1～20g/L 的氣相二氧化硅混勻后，離心收集上清液，取上清液即為完全脫脂卵黃抗體液。

優選的，第三步或第四步中離心條件為在2～8℃，10000g，30 分鐘。

本發明的有益效果是在卵黃抗體純化工藝中，以簡單便捷環保的方式實現了物料的完全脫脂，實用性好；完全脫脂的物料對卵黃抗體后續純化工藝帶來便捷，減輕了后續處理工藝難度和處理通量，同時降低了后續處理的耗材成本，經濟性高；解決了卵黃抗體應用于體外試劑診斷原料時，由于脫脂不完全對膠乳交聯和生化比濁干擾的問題，符合應用要求。

具體實施方式