[發明專利]可重復修飾的用于檢測腫瘤細胞的生物傳感器及其制備法在審
| 申請號： | 201811629125.5 | 申請日： | 2018-12-24 |
| 公開（公告）號： | CN110057877A | 公開（公告）日： | 2019-07-26 |
| 發明（設計）人： | 陳纘光;歐丹;孫端平 | 申請（專利權）人： | 中山大學 |
| 主分類號： | G01N27/26 | 分類號： | G01N27/26;G01N27/30;G01N27/327 |
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| 地址： | 510275 *** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 適配體 修飾 辣根過氧化物酶 檢測腫瘤細胞 生物傳感器 可重復 血紅素 聯體 制備 人乳腺癌細胞 細胞 對苯二酚 高靈敏度 高選擇性 過氧化氫 納米探針 新型金屬 有機框架 腫瘤細胞 電極 金電極 酶催化 納米酶 四面體 傳感 可用 捕獲 合成 引入 檢測 | ||
1.一種可重復修飾的用于檢測腫瘤細胞的生物傳感器，其特征在于，以金電極作為檢測界面，四面體連接雙適配體通過金硫鍵結合在金電極表面，納米探針通過適配體捕獲細胞而連接到細胞傳感界面。
2.根據權利要求1所述的一種可重復修飾的用于檢測腫瘤細胞的生物傳感器，其特征在于，四面體連接雙適配體(AS1411-A和MUC1-A)通過金硫鍵結合在金電極表面。
3.根據權利要求1或2所述的一種可重復修飾的用于檢測腫瘤細胞的生物傳感器，其特征在于，適配體MUC1和AS1411的比例1∶1時最佳。
4.根據權利要求1所述的一種可重復修飾的用于檢測腫瘤細胞的生物傳感器，其特征在于，納米探針集合新型金屬有機框架PCN-224-Pt、辣根過氧化物酶、雙適配體、血紅素、G-四聯體于一體。
5.一種可重復修飾的用于檢測腫瘤細胞的生物傳感器的制備法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)金電極的前處理：金電極首先用食人魚洗液浸泡15分鐘，然后置于打磨布上進行打磨，超聲處理后，再用0.5M的硫酸活化直到信號穩定；
(2)四面體連接的適配體的固定：分別取10μM的四面體單鏈連接的適配體AS1411-A、四面體單鏈AS1411-B、AS1411-C和AS1411-D于四支PCR管中，各加入等體積1mM的三氯乙基磷酸酯，反應1h。上述溶液均混合于同一PCR管中，于95℃條件下反應10min，馬上降溫至4℃條件下反應10min，可得四面體連接的適配體AS1411三維結構。四面體連接的適配體MUC1三維結構用MUC1-A、MUC1-B、MUC1-C和MUC1-D同法可得。取10μL兩種適配體溶液滴加到前處理過的金電極，于37℃條件下反應3h。兩種適配體通過Au-S鍵自主裝固定于金電極上，可高效、特異性地捕獲人乳腺癌細胞MCF-7；
所述的AS1411三維結構的四面體單鏈連接的適配體AS1411-A的序列為：5’-ACA TTCCTA AGT CTG AAA CAT TAC AGC TTG CTA CAC GAG AAG AGC CGC CAT AGT ATT TTT TTTTTG GTG GTG GTG GTT GTG GTG GTG GTG G-3’；
所述的MUC1三維結構的的四面體單鏈連接的適配體MUC1-A的序列為：5’-ACA TTC CTAAGT CTG AAA CAT TAC AGC TTG CTA CAC GAG AAG AGC CGC CAT AGT ATT TTT TTT TTGCAG TTG ATC CTT TGG ATA CCC TGG-3’；
所述的AS1411三維結構和MUC1三維結構的四面體單鏈B的序列為：5’-HS-TAT CAC CAGGCA GTT GAC AGT GTA GCA AGC TGT AAT AGA TGC GAG GGT CCA ATA C-3’；
所述的AS1411三維結構和MUC1三維結構的四面體單鏈C的序列為：5’-HS-TCA ACT GCCTGG TGA TAA AAC GAC ACT ACG TGG GAA TCT ACT ATG GCG GCT CTT C-3’；
所述的AS1411三維結構和MUC1三維結構的四面體單鏈D的序列為：5’-HS-TTC AGA CTTAGG AAT GTG CTT CCC ACG TAG TGT CGT TTG TAT TGG ACC CTC GCA T-3’；
(3)多功能納米探針的固定：隨后將合成的DNA酶(G-四聯體/血紅素)-雙適配體-PCN-224-Pt顆粒-辣根過氧化物酶納米探針引入到不同細胞濃度的傳感界面上，于37℃反應1小時。隨后將電極置于含有3mM對苯二酚和1.5mM過氧化氫的PBS溶液中，反應5分鐘，然后進行差示脈沖伏安法掃描；
所述的AS1411適配體的序列為：5’-HS-(CH2)6-TTTGGGTAGGGCGGGTTGGG-TTTTTT-GGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG-3’；
所述的MUC1適配體的序列為：5’-HS-(CH2)6-TTTGGGTAGGGCGGGTTGGG-TTTTTT-GCAGTTGATCCTTTGGATACCCTGG-3’；
(4)金電極的重復修飾：實驗結束后，外加電壓-1.7～-0.9V破壞Au-S鍵并重新生成裸的金電極表面，用于重新、反復修飾。
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