[發(fā)明專利]組合物、含有該組合物的分化誘導(dǎo)培養(yǎng)液及誘導(dǎo)方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811628297.0
• 申請日: 2018-12-28
• 公開（公告）號: CN109628387A
• 公開（公告）日: 2019-04-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 葛嘯虎;陳海佳;王小燕;戚康藝;姜交華
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州賽萊拉干細(xì)胞科技股份有限公司
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077;C12N5/0775
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 張柳;趙青朵

本發(fā)明涉及細(xì)胞領(lǐng)域，特別涉及組合物、含有該組合物的分化誘導(dǎo)培養(yǎng)液及誘導(dǎo)方法。本發(fā)明選用的牙髓干細(xì)胞(dental pulp stem cell，DPSCs)，與其他來源的MSCs一樣，具有自我更新和多向分化的能力，且具有易于體外擴增、免疫原性低等優(yōu)點，可作為種子細(xì)胞促進組織損傷的修復(fù)和再生。本發(fā)明公開的分化誘導(dǎo)培養(yǎng)液能夠有效促進DPSCs向軟骨細(xì)胞的特異性分化。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明提供的誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的DPSCs成軟骨分化的方法，能夠成功實現(xiàn)對DPSCs的成軟骨分化誘導(dǎo)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細(xì)胞領(lǐng)域，特別涉及組合物、含有該組合物的分化誘導(dǎo)培養(yǎng)液及誘導(dǎo)方法。

背景技術(shù)

隨著社會經(jīng)濟的發(fā)展，生活水平的而提高以及人口老齡化現(xiàn)象，以軟骨面破壞為主要表現(xiàn)的骨關(guān)節(jié)炎等疾病的發(fā)病率日益增加。因此，如何微創(chuàng)修復(fù)損傷的軟骨，緩解病人的痛苦、提高生活質(zhì)量長期以來就是骨科醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的重點方向之一。骨關(guān)節(jié)炎是骨科臨床的常見疾病，由于退行性病變、創(chuàng)傷等造成的關(guān)節(jié)軟骨缺損，已成為導(dǎo)致殘廢、影響生活質(zhì)量的重要原因。關(guān)節(jié)軟骨是一種無血管組織，軟骨細(xì)胞主要靠關(guān)節(jié)滑液及細(xì)胞周圍的基質(zhì)供給營養(yǎng)以無氧酵解供能，其自身的修復(fù)能力很有限。關(guān)節(jié)軟骨一旦損傷，就會引起關(guān)節(jié)疼痛、不穩(wěn)和僵硬，會加速關(guān)節(jié)的骨化，細(xì)胞外基質(zhì)降解的速度大于新基質(zhì)的合成，則遺留永久性病變，從而導(dǎo)致關(guān)節(jié)炎的發(fā)生。傳統(tǒng)的治療方法如軟骨下骨鉆孔術(shù)、軟骨移植、骨膜或軟骨膜移植、軟骨細(xì)胞移植等因修復(fù)組織以纖維軟骨為主，缺少正常透明軟骨的力學(xué)性能及耐用性，故不能取得滿意效果。

應(yīng)用組織工程方法修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損展示了令人鼓舞的前景。種子細(xì)胞是組織工程化軟骨形成的首要條件。間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)作為一種多潛能干細(xì)胞，因其成功避開了胚胎干細(xì)胞來源缺乏、異體排斥、倫理道德等諸多問題，近年來已成為干細(xì)胞領(lǐng)域的研究熱點。其不僅支持造血系統(tǒng)，還可向中胚層和外胚層來源的組織分化，在一定的實驗條件控制下可分化為肌細(xì)胞、成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞等。因此，MSCs具有廣闊的臨床應(yīng)用前景，是細(xì)胞替代治療和組織工程的首選種子細(xì)胞，是移植領(lǐng)域和自身性免疫疾病治療的研究熱點。

近年來研究表明，MSCs是一類來源于中胚葉的多潛能干細(xì)胞，具有自我更新和多向分化的能力，可作為種子細(xì)胞促進組織損傷的修復(fù)和再生。由于其組織來源廣泛，易于體外擴增、免疫原性低等優(yōu)點，已逐漸成為組織工程和細(xì)胞移植最理想的種子細(xì)胞。目前，骨髓來源MSCs是最常用的種子細(xì)胞，但其數(shù)量和分化潛能隨著年齡的增長顯著減少和降低，并且取材時易對供體造成身體傷害。因此，非常有必要尋找新的自體和異體移植的細(xì)胞來源。

牙髓組織位于牙齒內(nèi)部的牙髓腔內(nèi)，是牙體組織中唯一的軟組織。牙髓干細(xì)胞(dental pulp stem cell，DPSCs)為成體組織干細(xì)胞，Gronthos等人于2000年首次次報道從人的第三磨牙牙髓組織中提取，經(jīng)體外培養(yǎng)獲得集落狀生長，形態(tài)呈梭形，可自我更新和體外可誘導(dǎo)分化形成成牙本質(zhì)樣結(jié)構(gòu)一類間充質(zhì)干細(xì)胞。DPSCs與骨髓來源等間充質(zhì)干細(xì)胞相類似，具有多向分化的潛能，它除了能形成礦化結(jié)節(jié)能力的細(xì)胞外，經(jīng)過不同細(xì)胞因子的誘導(dǎo)，還能夠分化為脂肪、骨、軟骨、肌肉、血管內(nèi)皮、肝、神經(jīng)等細(xì)胞系類型。牙髓干細(xì)胞這種功能特性極大地吸引了來自基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)的研究者，給基礎(chǔ)科學(xué)的研究者們提供了一種研究發(fā)展生物學(xué)的模式，牙髓干細(xì)胞所具有的修復(fù)、替代和再生能力也為臨床醫(yī)學(xué)提供了一個發(fā)展新療法的機會。

MSCs的分化與其生長的微環(huán)境有密切關(guān)系，體外誘導(dǎo)MSCs分化是通過采取不同的方法模擬體內(nèi)相應(yīng)組織細(xì)胞生長的真實環(huán)境和必要條件。傳統(tǒng)的治療方法如軟骨下骨鉆孔術(shù)、軟骨移植、骨膜或軟骨膜移植、軟骨細(xì)胞移植等因修復(fù)組織以纖維軟骨為主，缺少正常透明軟骨的力學(xué)性能及耐用性，故不能取得滿意效果。

因此，提供一種誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的DPSCs成軟骨分化的組合物及方法具有重要的現(xiàn)實意義。

發(fā)明內(nèi)容