[發明專利]一種檢測畜禽肉制品中堿性著色劑的方法

在審

• 申請號: 201811624967.1
• 申請日: 2018-12-28
• 公開（公告）號: CN109765325A
• 公開（公告）日: 2019-05-17
• 發明（設計）人: 劉瑜;張柏瑀;劉寧;孟祥勇;韓宏乾;周健南;郭笑妍;顧俊杰;張彤
• 申請（專利權）人: 沈陽出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫綜合技術中心
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 北京弘權知識產權代理事務所(普通合伙) 11363
• 代理人: 逯長明;許偉群

1.一種檢測畜禽肉制品中堿性著色劑的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)樣品前處理：

稱取樣品放置于離心管中，加入提取液后，進行振蕩提取、離心，收集上清液后，再加入提取液重復提取一次，收集上清液，將兩次上清液合并；

將上清液經WCX固相萃取柱凈化，濃縮、定容后，備用；

2)定性分析：

運用UPLC-MS/MS-Qtrap法對經過樣品前處理的待檢測畜禽肉制品樣品進行篩查，采用液相色譜-串聯四極桿線性離子阱質譜儀的增強子離子掃描功能，建立MRM-IDA-EPI篩查方法，獲得待檢測畜禽肉制品樣品中各目標著色劑母離子的MS²譜圖；

用已知數據庫中各化合物的標準MS²譜圖與獲得待檢測畜禽肉制品樣品中各目標著色劑母離子的MS²譜圖分別進行對比，獲得相似度值，并匹配兩者的特征碎片離子，進而判斷待檢測畜禽肉制品樣品中是否含有目標堿性著色劑；

3)定量分析：

分別稱取各堿性著色劑標準品，用甲醇分別配制10μg/mL的標準儲備液，備用；

按照步驟1)中樣品前處理方法對空白樣品進行處理后，用空白樣品基質溶液稀釋標準儲備液，制成混合標準儲備溶液；

將混合標準儲備溶液定容后，得到空白樣品基質溶液，配制濃度為0.05μg/mL～5.0μg/mL的系列匹配標準工作溶液；

運用UPLC-MS/MS-Qtrap法，采用液相色譜-串聯四極桿線性離子阱質譜儀對系列匹配標準工作溶液和經過樣品前處理的待檢測畜禽肉制品樣品分別進行測定，獲得以濃度為橫坐標，定量離子的峰面積為縱坐標的繪制標準曲線，以此標準曲線來計算待檢測畜禽肉制品樣品中目標著色劑的含量。

2.根據權利要求1所述檢測畜禽肉制品中堿性著色劑的方法，其特征在于，所述提取液為乙腈與醋酸的混合溶液，其中，醋酸的體積濃度為1％。

3.根據權利要求1所述檢測畜禽肉制品中堿性著色劑的方法，其特征在于，所述堿性著色劑為：堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22、堿性嫩黃O、羅丹明B、堿性紅1、堿性紅2中的一種或多種。

4.根據權利要求1所述檢測畜禽肉制品中堿性著色劑的方法，其特征在于，所述步驟1)中樣品前處理具體為：

稱取5.00g樣品，置于100mL離心管中，加入提取液1％醋酸乙腈溶液20mL，振蕩提取20min，8000r/min離心5min，收集上清液于另一離心管中，再加入20mL提取液重復提取一次，收集上清液，將兩次上清液合并；

取20mL上清液過WCX固相萃取柱，依次用5mL甲醇、5mL水活化，用5mL 5％氨水淋洗，6mL2％甲酸甲醇溶液洗脫，40℃氮吹至近干，加入1.0mL體積濃度為20％的乙醇溶液溶解殘渣，樣液過0.22μm濾膜，備用。

5.根據權利要求1所述檢測畜禽肉制品中堿性著色劑的方法，其特征在于，所述步驟2)中液相色譜-串聯四極桿線性離子阱質譜儀的質譜條件為：

離子源：電噴霧離子源；

掃描模式：正離子掃描；

采集模式：多反應監測；

信息關聯掃描：強度閾值100cps；

增強子離子掃描：質量數采集范圍m/z 50～1000Da；

電噴霧電壓：5000V；

霧化氣壓力：50psi；

氣簾氣壓力：25psi；

輔助氣壓力：50psi；

離子源溫度：500℃；

去簇電壓：80V；

入口電壓：10V；

碰撞室出口電壓：11V；

碰撞氣能量：20、35、50V；

擴展碰撞能量：15V。