[發明專利]基于CdTe量子點聚集與循環酶雙重放大信號的電化學發光生物傳感器的構建及其應用

在審

• 申請號: 201811624787.3
• 申請日: 2018-12-28
• 公開（公告）號: CN109655450A
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發明（設計）人: 丁收年;朱紅允;梁秀麗;趙春芹;左家瑩;武錫錦;閆其報;劉金霞;徐來弟;陸天;朱凱迪;溫雪飛
• 申請（專利權）人: 東南大學
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/574;G01N33/543;G01N33/553;C09K11/88;B82Y15/00;B82Y30/00
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王艷

1.基于CdTe量子點聚集與循環酶雙重放大信號的電化學發光生物傳感器，其特征在于，所述電化學發光生物傳感器包括納米球構建的信號單元mSQS/DNA-F、非特異性結合位點被封閉的磁性探針Fe₃O₄@AuNPs/DNA-P以及DSN酶，所述信號單元mSQS/DNA-F為納米球mSQSNSs標記的功能性探針DNA-F，所述磁性探針Fe₃O₄@AuNPs/DNA-P為表面負載發夾結構探針DNA-P的Fe₃O₄@Au NPs，所述Fe₃O₄@Au NPs為表面負載Au納米粒子的Fe₃O₄。

2.根據權利要求1所述的電化學發光生物傳感器，其特征在于，所述功能性探針DNA-F和發夾結構探針DNA-P是根據miRNAs的堿基序列設計得到，所述發夾結構探針DNA-P與目標物miRNAs的互補配對發生構象變化得到，功能性探針DNA-F與發夾結構探針DNA-P酶切后剩余部分的序列互補。

3.權利要求1或2所述的電化學發光生物傳感器，其特征在于，所述信號單元mSQS/DNA-F的制備方法包括以下步驟：

1）納米球mSQSNSs的制備及氨基化；

2）使戊二醛與表面氨基化的mSQSNSs反應，獲得戊二醛功能化的mSQSNSs；

3）使所述的功能性探針DNA-F與步驟2）得到的戊二醛功能化的mSQSNSs反應，通過戊二醛的交聯反應將所述功能性探針DNA-F結合到mSQSNSs的表面，獲得信號單元mSQS/DNA-F。

4.根據權利要求1~3任一項所述的電化學發光生物傳感器，其特征在于，所述納米球mSQSNSs的粒徑為500-600 nm。

5.根據權利要求1或2所述的電化學發光生物傳感器，其特征在于，所述所述非特異性結合位點被封閉的磁性探針Fe₃O₄@AuNPs/DNA-P的制備方法包括以下步驟：

1）Fe₃O₄@AuNPs的制備；

2）探針DNA-P在TCEP的作用下高溫處理，獲得發夾結構探針DNA-P；

3）經過簡單的處理，通過Au-S鍵的結合發夾結構探針DNA-P負載到Fe₃O₄@AuNPs的表面；

4）使用6-巰基-1-己醇和牛血清蛋白封閉上述步驟3）獲得的表面修飾所述發夾結構DNA-P的Fe₃O₄@AuNPs的非特異性活性位點，獲得非特異性結合位點被封閉的磁性探針Fe₃O₄@AuNPs/DNA-P。

6.根據權利要求1或5所述的電化學發光生物傳感器，其特征在于，所述所述Fe₃O₄@Au的粒徑為330-390 nm。

7.權利要求1~6任一項所述的電化學發光生物傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）信號單元mSQS/DNA-F的制備；

2）非特異性結合位點被封閉的磁性探針Fe₃O₄@AuNPs/DNA-P的制備；

3）將上述制備的非特異性結合位點被封閉Fe₃O₄@AuNPs/DNA-P分別加入到含有DSN酶及不同濃度miRNA的PBS緩沖溶液中，在37°C的條件下震蕩，然后向溶液中加入DSN終止緩沖液，持續震蕩反應，用PBS緩沖液洗滌所得產物以除去物理吸附的miRNAs以及多余的DSN終止緩沖液，將信號單元mSQS/DNA-F與上述溶液在恒溫下震蕩反應，從而構建得到電化學發光生物傳感器。