[發明專利]一種熒光SSR引物組合及其在構建白蠟新品種分子指紋圖譜中的應用

有效

• 申請號: 201811624212.1
• 申請日: 2018-12-28
• 公開（公告）號: CN109652411B
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 燕麗萍;吳德軍;王因花;任飛;王開芳;姚俊修;李慶華;劉翠蘭;李善文;束德峰;張子通
• 申請（專利權）人: 山東省林業科學研究院;山東華博基因工程有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6895
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 李健康

本發明公開了一種熒光SSR引物組合及其在構建20個白蠟新品種分子指紋圖譜中的應用。其中熒光SSR引物組合由F202/R202和F208/R208的SSR引物對組成，在每對引物的上游引物的5′端加有FAM熒光標記，正向引物為與攜帶熒光標記的TP?M13引物組成；該引物組合是利用構建白蠟新品種的特異指紋圖譜或白蠟新品種分子身份證篩選獲得，可以將20個白蠟品種完全區分開，克服了以往形態、生理鑒定的技術缺陷。同時本發明也為DNA指紋圖譜在白蠟上的進一步應用研究以及評價白蠟種質資源和解決其品種產權糾紛提供科學、有效的參考依據。

技術領域

本發明涉及DNA指紋圖譜技術領域，具體而言，涉及一種熒光SSR引物組合及其在構建20個白蠟新品種分子指紋圖譜中的應用。

背景技術

白蠟屬(Fraxinus)隸屬木犀科(Oleceae)，木樨亞科。白蠟屬植物全世界約70余種，我國有30多種，種質資源非常豐富，無論實生苗還是栽培種，均具有豐富的遺傳多樣性，這可能與其異化授粉的生物學特性有關，對其種質資源進行鑒別評價是育種研究工作的重要環節之一，但其種或品種的植物學分類存在爭議。傳統的白蠟分類鑒別主要依靠翅果、花、芽、葉及花粉粒等形態學標記，以翅果和花性狀的差異最為明顯，其次是芽、葉緣鋸齒和果實缺刻被作為分類的依據。雖然形態標記研究簡單直觀且較經濟，但有些不同種或品種間的形態特征極為相似，在種間交互難以區分，造成了白蠟屬植物分類混淆問題，常出現同種多名稱以及同名多品種的現象，導致白蠟命名上存在一些爭議。在種質資源的鑒別中，僅依靠其形態性狀，通常不能準確的反映不同品種的差別，因為形態性狀極易受到環境的影響而發生變化，這給種或品種鑒別帶來困難。

近年來，隨著育種方法的不斷進步，新的白蠟品種也不斷涌現，這些白蠟種質資源有許多優異品種未能被合理利用，如何鑒別白蠟種的真偽、品種成為一個函待解決的問題。因此，將這些白蠟種質資源進行有效分類和鑒定，對白蠟種質資源的研究，品種創新尤為重要。

DNA指紋圖譜技術對白蠟品種精準鑒定提供了一種有效的技術手段。簡單重復序列(Simple Sequence repeat，SSR)分子標記具有分析方法簡便、快速、共顯性遺傳、信息含量高、重復性好等優點，使其成為構建白蠟品種分子身份證的較理想的分子標記技術，并且已成功應用于玉米、水稻、小麥、番茄、柑橘、馬鈴薯等主要農作物中。以此方法構建品種的分子指紋圖譜、鑒別品種的真偽和純度，對種子產業化和品種的知識產權保護有重大意義。但這種方法存在成本高、耗時、且通過好多對引物結合檢測位點才能鑒別。基于此，開發一種SSR引物組合并將其在構建20個白蠟新品種分子指紋圖譜中的應用，為DNA指紋圖譜在白蠟上的進一步應用，快速實現對白蠟新品種的區別與鑒定，克服以往形態、生理鑒定的技術缺陷，具有重要意義。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明要解決的問題是供用一種熒光SSR引物組合及其在構建20個白蠟新品種分子指紋圖譜中的應用。

本發明所述的熒光SSR引物組合，其特征在于：該熒光SSR引物組合由命名為F202和R202的SSR引物對和命名為F208和R208的SSR引物對組成，其中在每對引物的上游引物的5′端加有FAM(6-carboxy-fluorescein)熒光標記，正向引物為與攜帶熒光標記的TP-M13引物組成；所述F202和R202引物對中F202的核苷酸序列是如SEQ ID No.1所示的正向引物序列，R202的核苷酸序列是如SEQ ID No.2所示的正向引物序列，所述F208和R208引物對中F208的核苷酸序列是如SEQ ID No.3所示的正向引物序列，R208的核苷酸序列是如SEQ IDNo.4所示的正向引物序列。其詳細信息見表1。

表1：熒光SSR引物組合及其擴增信息