[發(fā)明專利]二價雙特異性抗體及其制備方法、編碼基因、宿主細胞、組合物

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811622069.2
• 申請日: 2018-12-28
• 公開（公告）號: CN111378045B
• 公開（公告）日: 2022-08-02
• 發(fā)明（設計）人: 馮曉;金磊;王濤;郭洪瑞;劉爽;陳宇珩;韓寧;梁陽秋
• 申請（專利權）人: 長春金賽藥業(yè)有限責任公司
• 主分類號: C07K16/46
• 分類號: C07K16/46;C12N15/13;C12N5/10
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 潘穎;趙青朵

1.能夠同時特異性結合PD-L1和CD47的二價雙特異性抗體，其特征在于，其包括：

a1)特異性結合第一抗原的抗體的單鏈可變片段scFv、柔性肽、重鏈IgG1恒定區(qū)CH1以及鉸鏈區(qū)部分序列，其連接順序依次為重鏈IgG1恒定區(qū)CH1、鉸鏈區(qū)部分序列、柔性肽和單鏈可變片段scFv；和

b1)特異性結合第二抗原的抗體的單鏈可變片段scFv和輕鏈恒定區(qū)CL，其連接順序依次為單鏈可變片段scFv和輕鏈恒定區(qū)CL；

其中，所述第一抗原為PD-L1，所述第二抗原為CD47，或者所述第一抗原為CD47，所述第二抗原為PD-L1；并且，特異性結合PD-L1的scFv中VL和VH的氨基酸序列分別如SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21所示；特異性結合CD47的scFv中VL和VH的氨基酸序列分別如SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:19所示；

或者包括：

a2)特異性結合第一抗原的抗體的單鏈可變片段scFv、柔性肽、重鏈IgG1恒定區(qū)CH1以及鉸鏈區(qū)部分序列，其連接順序依次為單鏈可變片段scFv、柔性肽、重鏈IgG1恒定區(qū)CH1和鉸鏈區(qū)部分序列；和

b2)特異性結合第二抗原的抗體的單鏈可變片段scFv和輕鏈恒定區(qū)CL，其連接順序依次為輕鏈恒定區(qū)CL和單鏈可變片段scFv；

其中，所述第一抗原為PD-L1，所述第二抗原為CD47，或者所述第一抗原為CD47，所述第二抗原為PD-L1；并且，特異性結合PD-L1的scFv中VL和VH的氨基酸序列分別如SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21所示；特異性結合CD47的scFv中VL和VH的氨基酸序列分別如SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:19所示；

或者包括：

a3)特異性結合第一抗原的抗體的單鏈可變片段scFv、重鏈IgG1恒定區(qū)CH1以及鉸鏈區(qū)部分序列，其連接順序依次為重鏈IgG1恒定區(qū)CH1、鉸鏈區(qū)部分序列和單鏈可變片段scFv；和

b3)特異性結合第二抗原的抗體的單鏈可變片段scFv和輕鏈恒定區(qū)CL，其連接順序依次為單鏈可變片段scFv和輕鏈恒定區(qū)CL；

其中，所述第一抗原為PD-L1，所述第二抗原為CD47，或者所述第一抗原為CD47，所述第二抗原為PD-L1；并且，特異性結合PD-L1的scFv中VL和VH的氨基酸序列分別如SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21所示；特異性結合CD47的scFv中VL和VH的氨基酸序列分別如SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:19所示；

或者包括：

a4)特異性結合第一抗原的抗體的單鏈可變片段scFv、重鏈IgG1恒定區(qū)CH1以及鉸鏈區(qū)部分序列，其連接順序依次為單鏈可變片段scFv、重鏈IgG1恒定區(qū)CH1和鉸鏈區(qū)部分序列；和

b4)特異性結合第二抗原的抗體的單鏈可變片段scFv和輕鏈恒定區(qū)CL，其連接順序依次為輕鏈恒定區(qū)CL和單鏈可變片段scFv；

其中，所述第一抗原為PD-L1，所述第二抗原為CD47，或者所述第一抗原為CD47，所述第二抗原為PD-L1；并且，特異性結合PD-L1的scFv中VL和VH的氨基酸序列分別如SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21所示；特異性結合CD47的scFv中VL和VH的氨基酸序列分別如SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:19所示；

或者包括：

c1)特異性結合第一抗原的抗體的輕鏈和重鏈；和

d1)特異性結合第二抗原的抗體的輕鏈和重鏈，其中輕鏈可變區(qū)與柔性肽以及鏈接肽相連，重鏈可變區(qū)通過柔性肽以及鏈接肽與重鏈Fc片段相連，所述鏈接肽為LGGC或GGGC，其中一條重鏈的鏈接肽LGGC或GGGC與一條輕鏈的鏈接肽LGGC或GGGC的末端半胱氨酸殘基能形成二硫鍵；

其中，所述第一抗原為PD-L1，所述第二抗原為CD47，或者所述第一抗原為CD47，所述第二抗原為PD-L1；并且，特異性結合PD-L1的抗體的輕鏈和重鏈中VL和VH的氨基酸序列分別如SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21所示；特異性結合CD47的抗體的輕鏈和重鏈中VL和VH的氨基酸序列分別如SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:19所示；

或者包括：

c2)特異性結合第一抗原的抗體的輕鏈和重鏈；和

d2)特異性結合第二抗原的抗體的輕鏈和重鏈，其中輕鏈可變區(qū)與鏈接肽相連，重鏈可變區(qū)通過鏈接肽與重鏈Fc片段相連，所述鏈接肽為LGGC或GGGC，其中一條重鏈的鏈接肽LGGC或GGGC與一條輕鏈的鏈接肽LGGC或GGGC的末端半胱氨酸殘基能形成二硫鍵；

其中，所述第一抗原為PD-L1，所述第二抗原為CD47，或者所述第一抗原為CD47，所述第二抗原為PD-L1；并且，特異性結合PD-L1的抗體的輕鏈和重鏈中VL和VH的氨基酸序列分別如SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21所示；特異性結合CD47的抗體的輕鏈和重鏈中VL和VH的氨基酸序列分別如SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:19所示。