[發明專利]抗體融合蛋白、制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201811620872.2
• 申請日: 2018-12-28
• 公開（公告）號: CN111378044B
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發明（設計）人: 馮曉;王濤;金磊;郭洪瑞;劉爽;韓寧;梁陽秋;陳宇珩
• 申請（專利權）人: 長春金賽藥業有限責任公司
• 主分類號: C07K16/46
• 分類號: C07K16/46;C12N15/13;C12N15/70;C12N1/21;A61K47/68;A61K45/00;A61P35/00;A61P35/02;A61P3/10;A61P9/10
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 張柳;趙青朵

1.抗體融合蛋白，其特征在于，其包括：

特異性結合第一抗原的抗體的輕鏈可變區、柔性肽、特異性結合第二抗原的融合蛋白、重鏈恒定區2和重鏈恒定區3，即VL-linker-Trap-CH2-CH3；和特異性結合第一抗原的抗體的重鏈可變區、柔性肽、特異性結合第二抗原的融合蛋白、重鏈恒定區2和重鏈恒定區3，即VH-linker-Trap-CH2-CH3；或

特異性結合第一抗原的抗體的輕鏈；和特異性結合第一抗原的抗體的重鏈可變區、重鏈恒定區1、柔性肽、特異性結合第二抗原的融合蛋白、重鏈恒定區2和重鏈恒定區3，即VH-CH1-linker-Trap-CH2-CH3；

其中，所述Trap的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述VL的氨基酸序列如SEQ IDNo.2所示，所述VH的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。

2.如權利要求1所述的抗體融合蛋白，其特征在于，還包括鉸鏈區。

3.如權利要求1所述的抗體融合蛋白，其特征在于，所述柔性肽為(G4S)n，其中n為大于0的整數。

4.如權利要求3所述的抗體融合蛋白，其特征在于，所述n為1～10的整數。

5.如權利要求1所述的抗體融合蛋白，其特征在于，所述輕鏈的恒定區和所述重鏈恒定區1能夠形成異源二聚體，所述輕鏈的恒定區的末端半胱氨酸殘基可以與重鏈的鉸鏈區上的半胱氨酸殘基形成二硫鍵。

6.如權利要求1所述的抗體融合蛋白，其特征在于，重鏈的鉸鏈區之間的半胱氨酸殘基能形成二硫鍵。

7.如權利要求1所述的抗體融合蛋白，其特征在于，其中，第一重鏈的重鏈恒定區3的結構域和第二重鏈的重鏈恒定區3的結構域被改變為促進形成所述抗體融合蛋白的結構。

8.如權利要求7所述的抗體融合蛋白，其特征在于，所述改變為：

c)改變第一重鏈的重鏈恒定區3的結構域：在與二價雙特異性抗體內的第二重鏈的重鏈恒定區3的結構域的初始界面相接觸的第一重鏈的重鏈恒定區3的結構域的初始界面內，氨基酸殘基被替換為具有大于原始氨基酸殘基體積的氨基酸殘基，在所述第一重鏈的重鏈恒定區3的結構域的界面內生成凸起，所述凸起可以定位在所述第二重鏈的重鏈恒定區3的結構域的界面內的凹洞中；且

d)改變第二重鏈的重鏈恒定區3的結構域：在與二價雙特異性抗體內的第一重鏈的重鏈恒定區3的結構域的初始界面相接觸的第二重鏈的重鏈恒定區3的結構域的初始界面內，氨基酸殘基被替換為具有小于原始氨基酸殘基體積的氨基酸殘基，在所述第二重鏈的重鏈恒定區3的結構域的界面內生成凹洞，在所述凹洞中可以定位所述第一重鏈的重鏈恒定區3的結構域的界面內的凸起。

9.如權利要求8所述的抗體融合蛋白，其特征在于，所述重鏈中，

所述具有大于原始氨基酸殘基體積的氨基酸殘基由精氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸組成；

所述具有小于原始氨基酸殘基體積的氨基酸殘基由丙氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、纈氨酸組成。

10.如權利要求1至9任一項所述的抗體融合蛋白，其特征在于，其具有：

氨基酸序列為SEQ ID No.7的重鏈，和氨基酸序列為SEQ ID No.10的輕鏈；或

氨基酸序列為SEQ ID No.5的重鏈，和氨基酸序列為SEQ ID No.9的輕鏈。

11.編碼如權利要求1至10任一項所述的抗體融合蛋白的核酸分子。

12.一種表達載體，其特征在于，包括如權利要求11所述的核酸分子。

13.一種細胞，其特征在于，包括如權利要求11所述的核酸分子，或由權利要求12所述表達載體轉化獲得。