[發(fā)明專利]一種含脂肪干細(xì)胞分泌物的脂質(zhì)體及其制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811620271.1
• 申請(qǐng)日: 2018-12-27
• 公開（公告）號(hào): CN109568270A
• 公開（公告）日: 2019-04-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭桂純;陳志勝;黃麗貞;趙姝燦;張曉芳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號(hào): A61K9/127
• 分類號(hào): A61K9/127;A61K35/28;A61P17/00
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 謝泳祥

本發(fā)明公開了一種含脂肪干細(xì)胞分泌物的脂質(zhì)體的制備方法，其包括如下工藝步驟：1)將大豆卵磷脂與膽固醇共同溶于熱無水乙醇溶液中，得混合溶液；2)將吐溫?80溶于含脂肪干細(xì)胞分泌物培養(yǎng)液中，磁力攪拌并加熱至40℃，得混合培養(yǎng)液；3)將步驟1)所得混合溶液緩慢滴加到步驟2)所得混合培養(yǎng)液中，40℃恒溫磁力攪拌10～20min，得乳化脂質(zhì)體懸浮液；4)將步驟3)所得乳化脂質(zhì)體懸浮液減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，進(jìn)行超聲混勻處理，得成品。本發(fā)明采用乙醇注入法制備含有脂肪干細(xì)胞分泌物的脂質(zhì)體，并通過完善原料配比及工藝參數(shù)獲得包封率較高的脂質(zhì)體，其包封率可達(dá)67％，且有良好的穩(wěn)定性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種含脂肪干細(xì)胞分泌物的脂質(zhì)體。

背景技術(shù)

脂肪干細(xì)胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)是脂肪組織中一類多能干細(xì)胞，其含 量豐富，易于分離，供區(qū)易被患者接受，近年來作為熱受追捧的間充質(zhì)干細(xì)胞，在再生醫(yī)學(xué) 和臨床工作中已受到了廣泛的關(guān)注與應(yīng)用。研究表明ADSC具有強(qiáng)大的旁分泌功能，可以產(chǎn) 生多種生長因子，激活臨近細(xì)胞或組織而產(chǎn)生相應(yīng)的生物學(xué)作用，在抗衰老、傷口愈合等方 面具有顯著的作用?？纱龠M(jìn)成纖維細(xì)胞增殖及膠原的分泌，使真皮內(nèi)膠原含量增加，分泌大 量新的細(xì)胞外基質(zhì)成分，從而修復(fù)原有的真皮層彈性纖維斷裂，重建、修復(fù)皮膚結(jié)構(gòu)，達(dá)到 皮膚真皮變厚、皮膚彈性增加，從而改善皮膚質(zhì)地。

我們通過將含有脂肪干細(xì)胞分泌物的培養(yǎng)液添加到衰老皮膚成纖維細(xì)胞中，發(fā)現(xiàn)其能顯 著提高皮膚成纖維細(xì)胞的活性，促進(jìn)I型膠原蛋白的合成，具有修復(fù)皮膚的作用。但該培養(yǎng) 液中的有效成分大多為生物大分子物質(zhì)，一般難以透過皮膚，如何更好地發(fā)揮脂肪干細(xì)胞分 泌物培養(yǎng)液的作用，使其能更好地應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)中是目前需要解決的問題。

脂質(zhì)體是一種可以自組形成的囊性空泡狀載體，可以包裹水性介質(zhì)溶解的溶質(zhì)，保護(hù)溶 質(zhì)的活性；脂質(zhì)體與細(xì)胞有著相似的磷脂雙層膜結(jié)構(gòu)，可以提高物質(zhì)的滲透作用，從而進(jìn)入 皮膚的深層。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種含脂肪干細(xì)胞分泌物的脂質(zhì)體的 制備方法。本發(fā)明所制備的含脂肪干細(xì)胞分泌物的脂質(zhì)體，既可以修復(fù)衰老損傷細(xì)胞，也可 以促進(jìn)皮膚吸收，提高生物利用率，有效推動(dòng)干細(xì)胞新制劑的研發(fā)。

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：一種含脂肪干細(xì)胞分泌物的脂質(zhì)體的制備方法，其包括如 下工藝步驟：

1)將大豆卵磷脂與膽固醇共同溶于熱無水乙醇溶液中，攪拌直至大豆卵磷脂和膽固醇 溶解，得混合溶液；

2)將吐溫-80溶于含脂肪干細(xì)胞分泌物培養(yǎng)液中，磁力攪拌并加熱至40℃，恒溫繼續(xù) 攪拌直至吐溫-80溶解均勻，得混合培養(yǎng)液；

3)將步驟1)所得混合溶液緩慢滴加到步驟2)所得混合培養(yǎng)液中，40℃恒溫磁力攪拌 10～20min，得乳化脂質(zhì)體懸浮液；

4)將步驟3)所得乳化脂質(zhì)體懸浮液減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，去除殘留乙醇，后進(jìn)行超聲混勻處 理80～100s，得成品。

作為上述方案的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟1)中所述的大豆卵磷脂與膽固醇的原料質(zhì)量份比為 6:1。

作為上述方案的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟1)中所述的熱無水乙醇溶液的溫度為55～65℃。

作為上述方案的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟2)中所述的吐溫-80與大豆卵磷脂的原料質(zhì)量份比 為8:25。

作為上述方案的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟3)中所述的緩慢滴加的滴加速度為500μL/min。

作為上述方案的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟3)中所述的攪拌速度為500r/min。

作為上述方案的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟4)中所述的減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的條件為轉(zhuǎn)速60r/min、溫 度50℃。