[發明專利]一種微生物混合發酵轉化降解黃芪甲苷制備環黃芪醇的方法

在審

• 申請號: 201811616663.0
• 申請日: 2018-12-28
• 公開（公告）號: CN109609581A
• 公開（公告）日: 2019-04-12
• 發明（設計）人: 張鵬;潘弘哲;陳毅明;李佳龍
• 申請（專利權）人: 北京化工大學
• 主分類號: C12P33/20
• 分類號: C12P33/20;C12R1/77
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.利用篩選出的兩種菌種Fusarium proliferatum 0821（CGMCC NO.16482）和Fusarium verticillioides 0213（CGMCC NO.16481），以黃芪甲苷為底物，通過兩種菌混合發酵，制得環黃芪醇。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于包括如下步驟：

種子培養

將保存的菌種Fusarium proliferatum 0821（CGMCC NO.16482）和Fusarium verticillioides 0213（CGMCC NO.16481）分別接入100mL裝有麥芽汁培養基的錐形瓶中，在25-30℃、150-200r/min的條件下培養36-48h，獲得種子液。

3.轉化培養

將步驟（1）培養的種子液各按10%的接種量接入100mL裝有發酵培養基的錐形瓶中，在25-30℃、150-200r/min的條件下培養6天，獲得發酵液。

4.（3）分離純化

將步驟（2）所得的發酵液經水飽和正丁醇等體積萃取三次后真空濃縮蒸干得到萃取產品，進一步利用硅膠柱層析分離純化，最終通過乙醇重結晶將產品的純度提高到95%以上，得到環黃芪醇產品。

5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：步驟（2）中的發酵培養基的組成為：黃芪粉2g/L，蛋白胨 5g/L，酵母粉 2g/L，K₂HPO₄ 1g/L，MgS0₄·7H₂0 0.5g/L，黃芪甲苷底物 0.2g/L。

6.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：發酵培養基配方中的黃芪粉是80目的黃芪粉，是直接將洗凈的黃芪根莖粉碎制成，黃芪甲苷底物的純度為50%-100%。

7.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：步驟（3）中的硅膠柱層析填料為100-200目硅膠粉，洗脫劑為體積比例分別為13:6:2的甲醇-氯仿-水的下層溶液。