[發明專利]基于碳量子點的熒光免疫分析方法

在審

• 申請號: 201811612977.3
• 申請日: 2018-12-27
• 公開（公告）號: CN109781976A
• 公開（公告）日: 2019-05-21
• 發明（設計）人: 沈建忠;王戰輝;溫凱;江海洋;董保磊;段長飛;于雪芝;史為民
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/535;G01N33/537
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

1.熒光碳量子點，其特征在于，所述熒光碳量子點按如下方案I或II制備得到：

方案I：將3-5g檸檬酸和5-7g硫脲加入到15-20mL水中，攪拌使化合物溶解，將混合液置于微波反應器中，800-1000W功率下加熱7-10min，直至溶液從無色變為深棕色固體，然后冷卻至室溫，加入25mL水溶解，所得碳量子點溶液經過濾、透析及色譜柱純化，即得；

方案II：將3-5g檸檬酸和5-7g尿素加入到15mL水中，攪拌使化合物溶解，將混合液置于微波反應器中，800-1000W功率下加熱7-10min，直至溶液從無色變為深棕色固體，然后冷卻至室溫，加入25mL水溶解，所得碳量子點溶液經過濾、透析及色譜柱純化，即得。

2.根據權利要求1所述的熒光碳量子點，其特征在于，所述熒光碳量子點按如下方案I′或II′制備得到：

方案I′：將5g檸檬酸和7g硫脲加入到15mL水中，攪拌使化合物溶解，將混合液置于微波反應器中，800W功率下加熱7分鐘，直至溶液從無色變為深棕色固體，然后冷卻至室溫，加入25mL水溶解，所得碳量子點溶液經過濾、透析及色譜柱純化，即得；

方案II′：將3g檸檬酸和5g尿素加入到15mL水中，攪拌使化合物溶解，將混合液置于微波反應器中，800W功率下加熱7分鐘，直至溶液從無色變為深棕色固體，然后冷卻至室溫，加入25mL水溶解，所得碳量子點溶液經過濾、透析及色譜柱純化，即得。

3.根據權利要求1所述的熒光碳量子點，其特征在于，所述過濾采用0.22μm膜過濾；和/或

所述透析使用型號為3500Da的透析膜在超純水中透析至少24h；和/或

所述色譜柱為Sephadex G25柱。

4.根據權利要求1-3任一項所述的熒光碳量子點，其特征在于，方案I制備的熒光碳量子點的激發波長為370-380nm，發射波長為520-530nm，優選激發波長為370nm，發射波長為520nm；方案II制備的熒光碳量子點的激發波長為400-410nm，發射波長為515-525nm，優選激發波長為400nm，發射波長為515nm。

5.權利要求1-4任一項所述熒光碳量子點的以下任一應用：

①制備生物探針、生物傳感器以及催化領域中的應用；

②在免疫分析中的應用。

6.基于碳量子點的熒光免疫分析方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、用人工抗原包被酶標板的各反應孔；

S2、向反應孔中加入特異性抗體和待測樣品溶液，孵育一段時間后，向反應孔中加入孔辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶標記的二抗，繼續孵育；

S3、向反應孔中加入辣根過氧化物酶底物3,3’,5,5’-四甲基聯苯胺溶液或堿性磷酸酶底物4-硝基苯磷酸二鈉溶液，進行顯色反應；

S4、顯色反應結束后，向反應孔中加入權利要求1-4任一項所述熒光碳量子點，檢測熒光強度；

S5、配制不同濃度的小分子半抗原標準品溶液，按照S2-S4進行檢測，建立反映熒光強度與小分子半抗原濃度之間關系的標準曲線；

S6、根據待測樣品溶液的檢測結果，對照標準曲線，獲得待測樣品溶液中小分子半抗原的濃度。