[發明專利]一種外泌體肺部腫瘤標志物LSM2的快速檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201811612459.1
• 申請日: 2018-12-27
• 公開（公告）號: CN109504775B
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 白茹;潘曉春;曾恒山
• 申請（專利權）人: 杭州迪相實業有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 沈淵琪

一種外泌體肺部腫瘤標志物LSM2的快速檢測試劑盒，屬于試劑盒技術領域。該試劑盒含有外泌體原位捕獲孔板或芯片，所述的外泌體原位捕獲孔板或芯片上含有熒光素標記的分子信標，所述的分子信標為檢測腫瘤標志物LSM2 mRNA的特異性DNA探針，所述的特異性DNA探針的5’端莖和環與靶基因完全互補，3’端莖與5’端莖部分互補，5’端和3’端分別用熒光基團和淬滅基團修飾，環上部分堿基用鎖核酸修飾。本發明的試劑盒運用了外泌體原位捕獲孔板和芯片技術，檢測肺部腫瘤患者體液樣品中外泌體所包含的，腫瘤標志物LSM2 mRNA。

技術領域

本發明屬于試劑盒技術領域，具體涉及一種外泌體肺部腫瘤標志物LSM2的快速檢測試劑盒。

背景技術

外泌體（exosome），是一種能被大多數細胞分泌的微小膜泡，直徑大約30-150 nm，具有脂質雙層膜結構，能很好地保護其包被的物質。這種微小膜泡中含有宿主細胞來源的特異的蛋白、脂質和核酸，能作為信號分子傳遞給其他細胞，是細胞之間通訊的重要媒介，可使受體細胞發生多種生物功能的改變。據報道，這種外逸性介導的細胞間通訊影響了癌癥的幾個特征，包括調節免疫反應、重編程基質細胞、重建細胞外基質結構，甚至賦予癌細胞耐藥特性。不同細胞分泌的外泌體組份和含量不同，選擇性地將特定的致癌分子裝入外泌體中，通過在腫瘤和遠端微環境的不同細胞之間轉移生物活性分子參與癌癥進展和轉移，使外泌體成為潛在的檢測生物標志物。

外泌體原位捕獲孔板或芯片技術是一種全新的外泌體原位捕捉與檢測技術，尤以檢測外泌體中的mRNA和microRNA見長。其以涂附了生物分子膜的活化玻璃為載體，包被能特異識別疾病相關microRNA 或mRNA靶標的分子信標（自行設計）的陽離子脂質納米顆粒，其與帶負電荷的外泌體融合后，分子信標與靶標結合而產生熒光信號，被全內反射熒光(TIRF，total internal reflection fluorescence) 顯微鏡檢測，信號強度與相應靶標含量成正比，從而判斷病程或鎖定病原體。由于TIRF成像具有超微，對熒光信號超敏感的特性，使得外泌體捕獲孔板或芯片結合TIRF成像技術，可以實現對外泌體這種納米級囊泡的直接成像及其內含物的半定量檢測。外泌體原位捕捉與檢測示意圖，如圖1所示。外泌體捕獲孔板或芯片可制作成24、48、96、384孔多種規格，每孔可包被單一或3種熒光素標記的分子信標，將多個腫瘤標志物基因檢測通道集成在一張捕獲孔板或芯片上，快捷、方便、經濟，優勢明顯。

由于外泌體在各種體液樣品中大量存在，且其中富含腫瘤細胞來源的特異性核酸，因此可以通過分離外泌體，運用高度靈敏的外泌體捕獲孔板或芯片檢測技術加以鑒定。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明的目的在于設計提供一種外泌體肺部腫瘤標志物LSM2的快速檢測試劑盒的技術方案。

所述的一種外泌體肺部腫瘤標志物LSM2的快速檢測試劑盒，其特征在于該試劑盒含有外泌體原位捕獲孔板或芯片，所述的外泌體原位捕獲孔板或芯片上含有熒光素標記的分子信標，所述的分子信標為檢測肺部腫瘤標志物LSM2 mRNA的特異性DNA探針，所述的特異性DNA探針的5’端莖和環與靶基因完全互補，3’端莖與5’端莖部分互補，5’端和3’端分別用熒光基團和淬滅基團修飾，環上部分堿基用鎖核酸修飾。