[發明專利]一種兩棲類動物細胞解離試劑盒

在審

• 申請號: 201811609987.1
• 申請日: 2018-12-27
• 公開（公告）號: CN111378613A
• 公開（公告）日: 2020-07-07
• 發明（設計）人: 王晨;黎瀚博;劉田賓;劉姍姍;范廣益;顧穎;劉心;徐訊
• 申請（專利權）人: 深圳華大生命科學研究院;青島華大基因研究院
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;何葉喧

本發明公開了一種兩棲類動物細胞解離試劑盒。本發明的試劑盒包括以下試劑：試劑C含有膠原酶Ⅰ和分散酶Ⅱ，濃度依次為43000?53000U/100ml、90?110units/100ml；試劑D含有膠原酶Ⅰ，濃度為55000?65000U/100ml。試劑E含有胰蛋白酶和金屬離子螯合劑，濃度依次為120000?180000USPU/100ml、0.03?0.07g/100ml。試劑F含有膠原酶Ⅱ，濃度為50000?55000U/100ml。本發明還保護一種解離兩棲動物組織獲得單細胞的方法：皮膚組織，剪碎，用試劑C處理；肌肉組織，剪碎，先加入試劑D處理，再加入試劑E處理；骨骼組織，切碎，用試劑F處理。本發明可以應用到各種兩棲動物肢體皮膚、肌肉，骨骼組織的單細胞研究。

技術領域

本發明涉及一種兩棲類動物細胞解離試劑盒。

背景技術

以蠑螈為代表的諸多兩棲動物具有強大的再生能力，但是由于其自身特性如細胞滲透壓、生活適應溫度與哺乳動物有較大差異，其細胞分離和培養方法丞待突破。

現在以兩棲類動物為實驗對象的實驗室多數以組織整體為研究對象，缺少對細胞異質性的探索，在一些科學問題上停滯不前。且對哺乳動物而言最常見的將組織或培養的細胞解離成單細胞的方法就是酶解的方法，而胰酶因為價格便宜、作用強，成為現在實驗室最常用酶。

現有技術中存在的問題如下：

(1)若以哺乳動物各類型的細胞解離方法，則存在解離溫度不適宜，無法控制酶的活性，細胞難以維持和體內相同的狀態，若以此為研究對象并不能確保實驗結果的真實性；

(2)解離效率不高，為了達到研究要求，需要解離更多組織，增加實驗成本；

(3)胰酶本身作用比較強，容易造成細胞膜損傷，引起細胞凋亡，難以保證細胞活率，不利于后續研究。

發明內容

本發明的目的是提供一種兩棲類動物細胞解離試劑盒。

本發明要求保護一種用于解離兩棲類動物組織獲得細胞的試劑盒，所述試劑盒包括以下試劑：試劑C、試劑D、試劑E和試劑F。

所述試劑C含有膠原酶Ⅰ和分散酶Ⅱ，膠原酶Ⅰ的濃度為43000-53000U/100ml,分散酶Ⅱ的濃度為90-110units/100ml。

所述試劑D含有膠原酶Ⅰ，膠原酶Ⅰ的濃度為55000-65000U/100ml。

所述試劑E含有胰蛋白酶和金屬離子螯合劑，胰蛋白酶的濃度為120000-180000USP U/100ml，金屬離子螯合劑的濃度為0.03-0.07g/100ml。

試劑F含有膠原酶Ⅱ，膠原酶Ⅱ的濃度為50000-55000U/100ml。

所述試劑C含有膠原酶Ⅰ和分散酶Ⅱ，膠原酶Ⅰ的濃度為48000U/100ml,分散酶Ⅱ的濃度為100units/100ml。

所述試劑D含有膠原酶Ⅰ，膠原酶Ⅰ的濃度為60000U/100ml。

所述試劑E含有胰蛋白酶和金屬離子螯合劑，胰蛋白酶的濃度為150000USP U/100ml，金屬離子螯合劑的濃度為0.03-0.07g/100ml。

試劑F含有膠原酶Ⅱ，膠原酶Ⅱ的濃度為52200U/100ml。

所述試劑C含有膠原酶Ⅰ和分散酶Ⅱ，膠原酶Ⅰ的濃度為0.1-0.3g/100ml,分散酶Ⅱ的濃度為0.1-0.3g/100ml。

所述試劑D含有膠原酶Ⅰ，膠原酶Ⅰ的濃度為0.2-0.3g/100ml。

所述試劑E含有胰蛋白酶和金屬離子螯合劑，胰蛋白酶的濃度為0.4-0.6g/100ml，金屬離子螯合劑的濃度為0.03-0.07g/100ml。