[發(fā)明專利]生物合成制備麥角硫因的方法和發(fā)酵培養(yǎng)基

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811605003.2
• 申請(qǐng)日: 2018-12-26
• 公開（公告）號(hào): CN109439701B
• 公開（公告）日: 2021-01-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魏玉潔;陸震;賈玉倩;孫元軍;陳雯雯;石艷麗;欒貽宏;郭學(xué)平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華熙生物科技股份有限公司;山東華熙海御生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/14
• 分類號(hào): C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 北京彩和律師事務(wù)所 11688
• 代理人: 劉磊;閆桑田

1.一種麥角硫因的生物合成制備方法，所述方法包括如下步驟：

將猴頭菌(Hericium erinaceus)菌絲體斜面菌種接種至液體種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)，獲得種子液；

將獲得的種子液接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵并添加前體物質(zhì)培養(yǎng)，通過pH判斷發(fā)酵至發(fā)酵終點(diǎn)，獲得發(fā)酵液；以及

發(fā)酵結(jié)束后，加入酶，酶解至終點(diǎn)，升溫滅酶，將菌絲體的細(xì)胞內(nèi)的麥角硫因浸提至細(xì)胞外的發(fā)酵液中；

所述猴頭菌為猴頭菌(Hericium erinaceus)CCTCC No：M 2018567；

所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括以下組分：2~6%(w/v)碳源、1~3%(w/v)的有機(jī)氮源、0.01~1%(w/v)的無機(jī)鹽、0.0001~0.001%(w/v)的微量元素，0.0001~0.001%(w/v)的輔酶，pH 4.0~6.0；

所述輔酶為煙酸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，在15~30℃、100~300rpm振蕩條件下，培養(yǎng)5~10天，獲得種子液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，在15~30℃、100~300rpm振蕩條件下，培養(yǎng)7~15天，獲得發(fā)酵液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1~3中任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，所述種子培養(yǎng)基包括以下組分：1~10%(w/v)蔗糖、1~5%(w/v)的豆餅粉、0.01~1%(w/v)的磷酸二氫鈉，0.01~1%(w/v)的硫酸鈉，pH 4.0~6.0。

5.根據(jù)權(quán)利要求1~3中任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，所述前體物質(zhì)包括以下一種或多種的組合：半胱氨酸、組氨酸、甲硫氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、甜菜堿。

6.根據(jù)權(quán)利要求1~3中任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，發(fā)酵終點(diǎn)時(shí)發(fā)酵液pH≥6.0，殘?zhí)菫?。

7.根據(jù)權(quán)利要求1~3中任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，所述酶包括以下一種或多種的組合：崩潰酶、蝸牛酶、透明質(zhì)酸酶、溶壁酶、β-葡聚糖酶、蛋白酶、纖維素酶、果膠酶。

8.根據(jù)權(quán)利要求1~3中任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，所述酶為蝸牛酶和崩潰酶。

9.根據(jù)權(quán)利要求1~3中任一項(xiàng)所述的制備方法，其中所述發(fā)酵培養(yǎng)基的碳源包括以下的一種或多種的組合：可溶性淀粉、甘油、葡萄糖、蔗糖、果糖、麥芽糖、乳糖、甘露醇、麥芽糖醇、玉米粉、半乳糖、麥芽糊精。

10.根據(jù)權(quán)利要求1~3中任一項(xiàng)所述的制備方法，其中所述發(fā)酵培養(yǎng)基的氮源包括以下的一種或多種的組合：牛肉膏、蛋白胨、酵母粉、酵母膏、黃豆粉、小麥蛋白胨、豆餅粉、豆粕、麩皮、酪蛋白胨、胰蛋白胨、玉米漿、大豆肽粉、尿素。

11.根據(jù)權(quán)利要求1~3中任一項(xiàng)所述的制備方法，其中所述發(fā)酵培養(yǎng)基的無機(jī)鹽包括以下的一種或多種的組合：氯化鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、氯化鉀、硫酸鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀。

12.根據(jù)權(quán)利要求1~3中任一項(xiàng)所述的制備方法，其中所述發(fā)酵培養(yǎng)基的微量元素包括以下的一種或多種的組合：硫酸錳、氯化亞鐵、氯化鋅、氯化錳、硫酸亞鐵。

13.根據(jù)權(quán)利要求1~3中任一項(xiàng)所述的制備方法，其中所述發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為：2~6%(w/v)葡萄糖、1~3%(w/v)的牛肉膏、0.01~0.05%(w/v)的磷酸二氫鈉、0.01~0.05%(w/v)硫酸鈉、0.0001~0.001%(w/v)的氯化鋅，0.0001~0.001%(w/v)的煙酸，其余為水。