[發(fā)明專(zhuān)利]一種VPS16基因L192V突變檢測(cè)的試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811603779.0
• 申請(qǐng)日: 2018-12-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111363798A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-07-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 唐景峰;黃淵;陳興珍;周策凡;賈振華
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 湖北工業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6883
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6883;C12Q1/6858
• 代理公司: 武漢科皓知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 彭勁松

本發(fā)明公開(kāi)了一種VPS16基因L192V突變檢測(cè)的試劑盒，屬于生物技術(shù)及臨床分子診斷技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)VPS16基因L192V突變能夠?qū)е屡两鹕〉漠a(chǎn)生，可通過(guò)檢測(cè)VPS16基因L192V突變對(duì)帕金森病病因進(jìn)行診斷。本發(fā)明試劑盒基于的方法是聯(lián)合PCR方法使用的肽PNA熒光探針?lè)椒ǎ饕ㄓ糜谔禺愋詳U(kuò)增VPS16基因L192V突變的正向引物，與VPS16基因L192V突變型互補(bǔ)的反向PNA熒光探針引物，序列分別如SEQ ID NO.1、2所示。本發(fā)明涉及的試劑盒實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，費(fèi)用低廉，結(jié)果重復(fù)性，敏感性好，是診斷帕金森病遺傳學(xué)病因及進(jìn)行基礎(chǔ)科學(xué)研究的重要手段。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)及臨床分子診斷技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種VPS16基因L192V突變檢測(cè)的試劑盒。

背景技術(shù)

帕金森病(Parkinson’s disease，PD)，又稱(chēng)為震顫麻痹(paralysis agitans)，是一種常見(jiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，老年人多見(jiàn)，平均發(fā)病年齡為60歲左右，40歲以下起病的青年帕金森病較少見(jiàn)。我國(guó)65歲以上人群PD的患病率大約是1.7％。帕金森病最主要的病理改變是中腦黑質(zhì)多巴胺(dopamine,DA)能神經(jīng)元的變性死亡，由此而引起紋狀體DA含量顯著性減少而致病。臨床上將PD分為特發(fā)性/散發(fā)性PD、家族性/遺傳性PD、繼發(fā)性PD和帕金森綜合征。到目前為止，帕金森病確切病因尚不十分清楚，且無(wú)有效的治療和治愈手段，因此對(duì)于疾病的預(yù)防顯得尤為重要，而帕金森病多數(shù)與遺傳相關(guān)，對(duì)有帕金森病家族史患者進(jìn)行遺傳性篩查顯得尤為重要。

目前遺傳研究發(fā)現(xiàn)，LRRK2、SNCA、VPS35、GCH1、ATXN2、DNAJC13、TMEM230、GIGYF2、HTRA2、RIC3、EIF4G1、UCHL1、CHCHD2以及GBA基因突變能夠?qū)е鲁Ｈ旧w顯性帕金森病的發(fā)生；PRKN、PINK1、DJ1、ATP13A2、PLA2G6、FBXO7、DNAJC6、SYNJ1、SPG11、VPS13C、PODXL以及PTRHD1基因突變能夠?qū)е码[性常染色體帕金森病的產(chǎn)生；以及RAB39B基因能夠?qū)е掳殡SX染色體帕金森病的發(fā)生，然而許多帕金森病患者遺傳風(fēng)險(xiǎn)因素未知，同時(shí)目前尚無(wú)有研究表明VPS16基因突變能夠?qū)е屡两鹕〉陌l(fā)生。

肽核酸(peptide nucleic acids，PNA)是一類(lèi)以多肽骨架取代糖磷酸主鏈的DNA類(lèi)似物。它是在第一代、第二代反義試劑的基礎(chǔ)上，通過(guò)計(jì)算機(jī)設(shè)計(jì)構(gòu)建并最終人工合成的第三代反義試劑，是一種全新的DNA類(lèi)似物，即以中性的肽鏈酰胺2-氨基乙基甘氨酸鍵取代了DNA中的戊糖磷酸二酯鍵骨架，其余的與DNA相同，PNA可以通過(guò)Watson-Crick堿基配對(duì)的形式識(shí)別并結(jié)合DNA或RNA序列，形成穩(wěn)定的雙螺旋結(jié)構(gòu)。由于PNA不帶負(fù)電荷，與DNA和RNA之間不存在靜電斥力，因而結(jié)合的穩(wěn)定性和特異性都大為提高；不同于DNA與DNA或RNA間的雜交，PNA與DNA或RNA的雜交幾乎不受雜交體系鹽濃度影響，與DNA或RNA分子的雜交能力遠(yuǎn)優(yōu)于DNA/DNA或DNA/RNA，表現(xiàn)在很高的雜交穩(wěn)定性、優(yōu)良的特異序列識(shí)別能力、不被核酸酶和蛋白酶水解。

本發(fā)明采用特異序列的PNA寡聚物作為探針。由于PNA是一種人工合成的核酸的類(lèi)似物，并且為非手性、不帶電荷的分子，避免了寡核苷酸與其靶基因結(jié)合時(shí)因電荷相互排斥所導(dǎo)致的雜交不穩(wěn)定性，結(jié)合不易受雜交液離子強(qiáng)度的影響，從而顯示出極強(qiáng)的雜交優(yōu)勢(shì)，大大提高了檢測(cè)靈敏度。

發(fā)明內(nèi)容

我們?cè)诨加信两鹕〉募蚁抵型ㄟ^(guò)遺傳學(xué)手段篩查首次發(fā)現(xiàn)VPS16基因L192V突變能夠?qū)е屡两鹕〉漠a(chǎn)生，因此VPS16基因可用于帕金森病病因的診斷。

本發(fā)明的目的在于提供VPS16基因在制備帕金森病病因診斷試劑或診斷試劑盒中的應(yīng)用，通過(guò)檢測(cè)VPS16基因L192V突變進(jìn)行帕金森病病因的診斷。即所述的帕金森病病因診斷試劑或診斷試劑盒為VPS16基因L192V突變檢測(cè)的試劑或試劑盒。

為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：