[發明專利]使用模擬移動床色譜純化中性人乳寡糖的方法

有效

• 申請號: 201811603666.0
• 申請日: 2014-10-02
• 公開（公告）號: CN109705175B
• 公開（公告）日: 2022-07-05
• 發明（設計）人: 斯特凡·詹尼文;馬庫斯·海福力克
• 申請（專利權）人: 科漢森HMO有限責任公司
• 主分類號: C07H3/06
• 分類號: C07H3/06;C07H1/06;C08B37/00;A23L33/125;A61P1/00
• 代理公司: 北京同立鈞成知識產權代理有限公司 11205
• 代理人: 關浩;臧建明

1.一種用于在連續色譜中從含有中性人乳寡糖和污染物的粗溶液中純化中性人乳寡糖的方法，其中所述中性人乳寡糖是中性人乳三糖、四糖、戊糖或己糖，

其中所述含有中性人乳寡糖和污染物的粗溶液包含微生物發酵提取物，或者由微生物發酵提取物組成，其中所述溶液中的中性人乳寡糖的純度80％，

其特征在于，將所述粗溶液應用到至少一個使用模擬移動床色譜的純化步驟，提供其中含有具有≥80％純度的所述中性人乳寡糖的純化溶液，

其中，在將所述溶液應用到至少一個使用模擬移動床色譜的純化步驟之前，或在將所述溶液應用到使用模擬移動床色譜的純化步驟之后，將含有中性人乳寡糖的溶液進行電滲析。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述粗溶液中的中性人乳寡糖的純度為≤70％，≤60％，≤50％，≤40％，≤30％，≤20％，≤10％或≤5％和/或純化溶液含有具有≥85％的純度。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，至少一個模擬移動床色譜具有

i)至少4個柱子，其中至少一個柱子包括弱的或強的陽離子交換樹脂；和/或

ii)具有不同流速的四個區域I，II，III和IV；

iii)洗脫液，其包含水或由水組成；和/或

iv)操作溫度為15℃至60℃。

4.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，將所述純化溶液應用到至少一個進一步的使用模擬移動床色譜的純化步驟，提供其中含有具有≥92％純度的所述中性的人乳寡糖的純化溶液。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，進一步的模擬移動床色譜具有

i)至少4個柱子，其中至少一個柱子包括弱的或強的陽離子交換樹脂；和/或

ii)具有不同流速的四個區域I，II，III和IV；

iii)洗脫液，其包含水或由水組成；和/或

iv)操作溫度為15℃至60℃。

6.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述微生物發酵提取物是在至少一個微生物發酵步驟獲得的，在所述至少一個微生物發酵步驟后進行以下至少一個步驟

a)對所述粗溶液進行過濾以在微生物發酵后將可溶性物質與不溶性物質分離；

b)離子交換色譜；

c)對溶液進行濃縮；

d)對溶液進行滲析；

e)使用模擬移動床色譜對溶液進行色譜分離；

f)對溶液進行過濾；以及

g)對含有所述中性人乳寡糖的純化溶液進行噴霧干燥。

7.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，在將所述溶液應用到所述至少一個模擬床移動色譜步驟之前，將所述含有中性人乳寡糖的溶液

i)進行過濾以去除任何不溶物質；和/或

ii)應用到至少一個使用陽離子和/或陰離子交換色譜的純化步驟。

8.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，在滲析之后，將所述包含中性人乳寡糖的溶液進行濃縮

i)濃縮到≥100g/l的濃度；和/或

ii)采用真空濃縮器濃縮；和/或

iii)通過納濾濃縮；和/或

iv)在4℃至50℃的溫度下進行濃縮。

9.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述純化溶液是無菌過濾的和/或經去除內毒素的。

10.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述純化溶液是經噴霧干燥的。