[發明專利]一種多粘菌素B磁珠、制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201811601369.2
• 申請日: 2018-12-26
• 公開（公告）號: CN109557303B
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發明（設計）人: 崔浪軍;陳蓓;申蕭蒙;陳雪;黃自華;馮潤東;王莉芳;李曉春;張鵬
• 申請（專利權）人: 陜西師范大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/569
• 代理公司: 西安恒泰知識產權代理事務所 61216
• 代理人: 李鄭建

本發明公開了一種多粘菌素B磁珠、制備方法及其應用，主要通過將Fe₃O₄納米磁珠與多粘菌素B溶液混合后在40～60℃下攪拌2～5h，得到表面包覆多粘菌素B的Fe₃O₄納米磁珠，即多粘菌素B磁珠。該多粘菌素B磁珠包括Fe₃O₄納米磁珠以及包覆在Fe₃O₄納米磁珠表面的多粘菌素B。本發明制備的多粘菌素B磁珠通過特異的多粘菌素B分子聚陽離子環與b型流感嗜血桿菌細胞膜上的脂蛋白游離負電荷的磷酸基通過靜電作用相結合，具有準確性高和特異性強的特點。能夠從腦積液中快速富集痕量的b型流感嗜血桿菌，達到良好的吸附效果。同時提高了b型流感嗜血桿菌的檢測效率和靈敏度。

技術領域

本發明屬于納米材料和細菌檢驗技術領域，具體涉及一種多粘菌素B磁珠、制備方法及其應用。

背景技術

b型流行性感冒嗜血桿菌簡稱HIB，即b型流感嗜血細菌，是引起幼兒細菌性腦膜炎、肺炎、菌血癥等感染性疾病及死亡的主要病原菌之一，嚴重危害嬰幼兒健康。HIB疫苗適用于從2-17月齡的嬰幼兒常規免疫接種，預防HIB引起的侵襲性疾病。由于幼兒對免疫接種的吸收率不高、接種效果欠佳等問題，會出現流感嗜血桿菌(HIB)引起的疾病，但目前國內缺乏對HIB疾病的有效監測和對疾病負擔的準確評估。因此，對b型流感嗜血桿菌進行快速準確的檢測是很有必要的。

目前常用于吸附b型流感嗜血桿菌的方法有免疫法及傳統的増菌培養法，這些方法能夠實現b型流感嗜血桿菌與樣品的分離，但増菌過程中存在易污染、濃縮效率低，免疫法成本高等問題。而且患者提供的樣本量小、b型流感嗜血桿菌含量較低并且有大量雜菌生長，對b型流感嗜血桿菌(HIB)的分離培養影響較大。

發明內容

針對現有技術存在的上述局限性，本發明的目的是提供一種多粘菌素B磁珠、制備方法及其應用，解決傳統的培養方法富集b型流感嗜血桿菌，尤其是痕量菌時效率低、出現假陽性的問題。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案予以實現：

一種多粘菌素B磁珠，包括Fe₃O₄納米磁珠以及包覆在Fe₃O₄納米磁珠表面的多粘菌素B。

本發明還公開了一種多粘菌素B磁珠的制備方法，其特征在于，包括：將Fe₃O₄納米磁珠與多粘菌素B溶液混合后在40～60℃下攪拌2～5h，得到表面包覆多粘菌素B的Fe₃O₄納米磁珠，即多粘菌素B磁珠。

具體的，所述的多粘菌素B經過預處理后與Fe₃O₄納米磁珠混合，多粘菌素B的預處理過程為：

將氯甲酸芐酯、乙醚、NaHCO₃溶液共同混合在二氯甲烷溶液中，制備反應液；將反應液與多粘菌素B混合，在25～40℃、300～500r/min下攪拌2～4h，分離，獲得初步預處理的多粘菌素B；

將賴氨酸溶于檸檬酸和檸檬酸鈉的混合液中，混合液的pH＝4.8～6.6，再加入DCC和DMAP，室溫、200～500r/min下攪拌10～30min，得到活化后的賴氨酸；

將活化后的賴氨酸加入到初步預處理的多粘菌素B的溶液中，室溫、100～500r/min下攪拌0.5～3h，得到預處理后的多粘菌素B。

優選的，所述的多粘菌素B與氯甲酸芐酯的質量比為3：2；氯甲酸芐酯的質量：NaHCO₃的質量：乙醚的體積＝1：0.5～1：0.5～2.5，其中，質量的單位為g，體積的單位為ml；所述的賴氨酸、DCC和DMAP的質量比為1：2：0.5；所述的賴氨酸和多粘菌素B的質量比為1.25：1。