[發明專利]定點突變改造的賴氨酸合成途徑關鍵酶基因AK2和DHPS1及其應用

有效

• 申請號: 201811599767.5
• 申請日: 2018-12-26
• 公開（公告）號: CN109593742B
• 公開（公告）日: 2022-04-22
• 發明（設計）人: 劉巧泉;吳宏玉;楊晴晴;辛世文
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12;C12N9/88;C12N15/54;C12N15/60;C12N15/82;A01H5/00;A01H5/10;A01H6/46
• 代理公司: 揚州蘇中專利事務所(普通合伙) 32222
• 代理人: 沈志海

1.定點突變改造的天冬氨酸激酶AK2及二氫毗考琳酸合成酶DHPS1，作用于水稻的賴氨酸合成途徑，其特征在于，

所述定點突變改造的天冬氨酸激酶AK2的氨基酸序列如SEQ ID NO 4所示；所述定點突變改造的二氫毗考琳酸合成酶DHPS1的氨基酸序列如SEQ ID NO 8所示。

2.根據權利要求1所述的定點突變改造的天冬氨酸激酶AK2及二氫毗考琳酸合成酶DHPS1，其特征在于，所述定點突變改造的天冬氨酸激酶AK2是由氨基酸序列為SEQ ID NO 2所示的來源于Oryza sativa水稻的天冬氨酸激酶AK進行體外定點突變修飾得到的，其第449位氨基酸由絲氨酸變成了亮氨酸；

所述定點突變改造的二氫毗考琳酸合成酶DHPS1是由氨基酸序列為SEQ ID NO 6所示的來源于水稻的二氫毗考琳酸合成酶DHPS進行體外定點突變修飾得到的，其第124位氨基酸由絲氨酸變成了天冬酰胺。

3.權利要求1-2中任意一項權利要求所述的定點突變改造的天冬氨酸激酶AK2的編碼基因及二氫毗考琳酸合成酶DHPS1的編碼基因，其特征在于，所述定點突變改造的天冬氨酸激酶AK2的編碼基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO 3所示；

所述定點突變改造的二氫毗考琳酸合成酶DHPS1的編碼基因，其核苷酸序列SEQ ID NO7所示。

4.權利要求3所述定點突變改造的天冬氨酸激酶AK2的編碼基因及二氫毗考琳酸合成酶DHPS1的編碼基因在構建高賴氨酸轉基因水稻中的應用。

5.一種重組質粒，包含權利要求3所述定點突變改造的天冬氨酸激酶AK2的編碼基因及二氫毗考琳酸合成酶DHPS1的編碼基因；且，所述重組質粒的構建方法是：將權利要求3所述的AK2和DHPS1的編碼基因克隆到pSB130超雙元表達載體上，利用組成型表達的CaMV 35S啟動子驅動AK2和DHPS1基因，構建包含AK2和DHPS1基因重組質粒表達載體。

6.一種高賴氨酸轉基因水稻的構建方法：通過農桿菌介導法或基因槍法將權利要求5所述的重組質粒導入水稻胚性愈傷組織中，經篩選、分化和生根獲得高賴氨酸轉基因水稻；通過聚合酶鏈式反應檢測目的基因獲得轉基因陽性植株和陽性純合系；通過熒光實時定量PCR方法檢測修飾后的目的基因AK2和DHPS1在水稻中的表達水平，通過氨基酸分析驗證改造后的AK2和DHPS1在水稻中的效應。