[發明專利]一種犬瘟熱病毒抗體熒光檢測試紙條及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201811596427.7
• 申請日: 2018-12-26
• 公開（公告）號: CN109856407B
• 公開（公告）日: 2022-11-18
• 發明（設計）人: 何方洋;崔廷婷;王兆芹;龍光宗;魯曉雄;劉二戰;萬宇平;賈芳芳;朱亮亮;馮才偉
• 申請（專利權）人: 北京勤邦生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569;G01N33/531
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本發明公開了一種犬瘟熱病毒抗體熒光檢測試紙條及其制備方法和應用。本發明所提供的試紙條包括樣品吸收墊、結合物釋放墊a、結合物釋放墊b、硝酸纖維素膜、吸水墊及底板，所述結合物釋放墊a上噴涂有雞抗犬抗抗體?生物素偶聯物，所述結合物釋放墊b上噴涂有鏈霉親和素?熒光微球標記物，所述硝酸纖維素膜上有檢測線和質控線，所述檢測線上包被有犬瘟熱病毒N表達蛋白，所述質控線上包被有羊抗雞抗抗體。本發明的試紙條具有靈敏度高、特異性強、操作簡單、經濟實用等優點，可實現犬瘟熱病毒抗體現場快速定量檢測。

技術領域

本發明涉及犬瘟熱病毒抗體的檢測，具體涉及一種犬瘟熱病毒抗體熒光檢測試紙條及其制備方法和應用。

技術背景

犬瘟熱(Canine Distemper，CD)是由犬瘟熱病毒(Canine Distemper Virus，CDV)感染引起的一種急性、高度接觸性傳染病，是對養犬業、毛皮動物養殖業和野生動物保護危害最大的疫病之一。CDV屬于副粘病毒科麻疹病毒屬，是負鏈單股不分節的RNA病毒。CDV主要由核衣殼蛋白N、磷蛋白P、基質膜蛋白M、融合蛋白F、附著或血凝蛋白H、大蛋白L等6種蛋白組成，其中核衣殼蛋白N、融合蛋白F以及血凝蛋白H是犬免疫系統的主要目的抗原，是產生中和抗體的重要抗原。核衣殼蛋白N是保守性較強的免疫原性蛋白，除含B細胞表位，還含有T細胞表位，在犬瘟熱感染的早期免疫應答中起主要作用，能引起強烈的抗體反應。

犬瘟熱病毒病主要是通過疫苗預防，而疫苗免疫動物與感染動物體內都會產生結構蛋白抗體，因此檢測結構蛋白抗體的診斷方法能確定動物對病毒株的抵抗力。同時日常監測疫苗產生抗體是對群體的日常監測選擇疫苗、評估免疫程序合理性、掌握健康狀態的重要手段，同時也可從側面反映管理是否合理，也是適時注射疫苗的主要依據。

目前已建立的用于檢測CDV抗體的血清學方法主要有血凝抑制試驗、中和試驗、ELISA法及免疫膠體金法等。血凝抑制試驗需要新鮮且敏感性高的紅細胞，檢測時間需要2～3h；中和試驗操作繁瑣，需要較高的試驗條件和操作水平，整個試驗需1～2周的時間才能出結果；ELISA方法操作要求高，需要酶標儀測定結果，且不適合做單個樣本的檢測；免疫膠體金法雖然檢測方便，不需專業技術人員和工作環境，但其檢測的靈敏度低，且只能定性，檢測范圍窄。這些都限制了它們在犬瘟熱病毒抗體臨床檢測中的應用，因此，本發明專利的目的就是克服以上幾種方法的缺點，建立一種操作簡便、靈敏、特異、快速的犬瘟熱病毒抗體定量檢測方法，應用于犬瘟熱病毒免疫效果的監測，從而限制犬瘟熱病毒的流行。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種犬瘟熱病毒抗體熒光檢測試紙條。

本發明所提供的犬瘟熱病毒抗體熒光檢測試紙條，包括樣品吸收墊、結合物釋放墊a、結合物釋放墊b、硝酸纖維素膜、吸水墊及底板；所述結合物釋放墊a上噴涂有雞抗犬抗抗體-生物素偶聯物；所述結合物釋放墊b上噴涂有鏈霉親和素-熒光微球標記物；所述硝酸纖維素膜上有檢測線和質控線，所述檢測線上包被有犬瘟熱病毒N表達蛋白，所述質控線上包被有羊抗雞抗抗體。

所述結合物釋放墊a上采用的雞抗犬抗抗體為雞抗犬IgG的IgY，所述硝酸纖維素膜上質控線采用的羊抗雞抗抗體為羊抗雞IgY的IgG。

所述樣品吸收墊、結合物釋放墊a、結合物釋放墊b、硝酸纖維素膜、吸水墊順次固定在所述底板上。

本發明的另一個目的是提供一種上述犬瘟熱病毒抗體熒光檢測試紙條的制備方法，其包括步驟：

1)制備具有包被有犬瘟熱病毒N表達蛋白的檢測線和包被有羊抗雞抗抗體的質控線的硝酸纖維素膜；

2)制備噴涂有雞抗犬抗抗體-生物素偶聯物的結合物釋放墊a和噴涂有鏈霉親和素-熒光微球標記物的結合物釋放墊b；

3)將樣品吸收墊、結合物釋放墊a、結合物釋放墊b、硝酸纖維素膜、吸水墊順次固定在底板上。

具體地說，步驟包括：