[發明專利]用于檢測呼吸道感染病原體的核酸試劑、試劑盒、系統及方法

有效

• 申請號: 201811593412.5
• 申請日: 2018-12-25
• 公開（公告）號: CN109609692B
• 公開（公告）日: 2019-09-13
• 發明（設計）人: 張志強
• 申請（專利權）人: 北京卓誠惠生生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/689;C12Q1/04;C12Q1/686;C12N15/11;C12M1/34
• 代理公司: 北京英創嘉友知識產權代理事務所(普通合伙) 11447
• 代理人: 蘇瑞;耿超

1.一種用于檢測呼吸道感染病原體的核酸試劑，其中，所述核酸試劑包括分別彼此獨立存放或互相任意混合存放的SEQ ID NO.1-24所示的引物和SEQ ID NO.27-45所示的探針。

2.根據權利要求1所述的核酸試劑，其中，相對于1μM的SEQ ID NO.1所示的引物，分別由SEQ ID NO.2-24所示的引物的含量各自為0.3-0.5μM、0.8-1.0μM、0.3-0.5μM、0.8-1.0μM、0.4-0.6μM、0.6-1.0μM、0.4-0.6μM、0.8-1.0μM、0.4-0.5μM、0.6-1.0μM、0.3-0.5μM、0.6-1.0μM、0.4-0.5μM、0.6-1.0μM、0.1-0.4μM、0.6-1.0μM、0.3-0.5μM、0.8-1.0μM、0.3-0.5μM、0.8-1.0μM、0.3-0.5μM、0.8-1.0μM和0.3-0.5μM，分別由SEQ ID NO.27-45所示的探針的含量各自為0.1-0.3μM、0.2-0.4μM、0.1-0.3μM、0.1-0.3μM、0.1-0.3μM、0.2-0.4μM、0.2-0.4μM、0.1-0.3μM、0.2-0.4μM、0.1-0.3μM、0.2-0.4μM、0.1-0.3μM、0.1-0.3μM、0.1-0.3μM、0.2-0.4μM、0.2-0.4μM、0.1-0.3μM、0.1-0.3μM和0.1-0.3μM。

3.根據權利要求1所述的核酸試劑，其中，所述核酸試劑還包括陽性內質控；

所述陽性內質控含有SEQ ID NO.25-26所示的引物和SEQ ID NO.46所示的探針。

4.根據權利要求3所述的核酸試劑，其中，所述核酸試劑包括A管、B管、C管和D管；A管含有SEQ ID NO.1-10,25-26所示的引物和SEQ ID NO.27-32,46所示的探針；B管含有SEQ IDNO.11-14,25-26所示的引物和SEQ ID NO.33-37,46所示的探針；C管含有SEQ ID NO.15-20,25-26所示的引物和SEQ ID NO.38-40,46所示的探針；D管含有SEQ ID NO.21-26所示的引物和SEQ ID NO.41-46所示的探針。

5.根據權利要求4所述的核酸試劑，其中，SEQ ID NO.27,29,33,34,38,41,42所示的探針具有第一熒光標記；SEQ ID NO.28,30,35,36,39,43,45所示的探針具有第二熒光標記；SEQ ID NO.31,32,37,40,44所示的探針具有第三熒光標記；SEQ ID NO.46所示的探針具有第四熒光標記；所述第一熒光標記、所述第二熒光標記、所述第三熒光標記和所述第四熒光標記各不相同，且各自獨立地選自FAM熒光標記、JOE熒光標記、CY5熒光標記、ROX熒光標記、HEX熒光標記、VIC熒光標記和Quasar670熒光標記中的一種。

6.根據權利要求1～5中任意一項所述的核酸試劑，其中，所述呼吸道感染病原體包括甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒A型、呼吸道合胞病毒B型、腺病毒、人副流感I型病毒、人副流感II型病毒、人副流感III型病毒、人副流感IV型病毒、人鼻病毒、人偏肺病毒、肺炎衣原體、肺炎支原體、嗜肺軍團菌、冠狀病毒NL63、冠狀病毒HKUI、冠狀病毒229E、冠狀病毒OC43和博卡病毒中的至少一種。

7.一種用于檢測呼吸道感染病原體的試劑盒，該試劑盒含有權利要求1～6中任意一項所述的核酸試劑，并且可選地，所述試劑盒還含有反應體系緩沖液、DNA聚合酶、逆轉錄酶、鎂離子、dNTP和水中的至少一種。

8.權利要求1～6中任意一項所述的核酸試劑在制備用于檢測呼吸道感染病原體的試劑盒中的用途。

9.一種用于檢測呼吸道感染病原體的系統，該系統包括具有A管檢測器、B管檢測器、C管檢測器和D管檢測器的PCR儀、計算裝置和輸出裝置，所述A管檢測器、B管檢測器、C管檢測器和D管檢測器分別為裝載有權利要求4～6中任意一項所述的核酸試劑的核酸試劑儲藏容器，所述PCR儀包括第一熒光通道、第二熒光通道、第三熒光通道和第四熒光通道，所述第一熒光通道、所述第二熒光通道、所述第三熒光通道和所述第四熒光通道各不相同，且各自獨立地為FAM熒光通道、JOE熒光通道、CY5熒光通道、ROX熒光通道、HEX熒光通道、VIC熒光通道或Quasar670熒光通道；所述計算裝置包括存儲器和處理器，所述存儲器中存儲有計算機程序，所述處理器被配置為執行所述存儲器中存儲的計算機程序，以實現如下的判別：

若陽性對照成立，則檢測結果有效；

若A管第一熒光通道有Tm值為69℃對應的溶解峰曲線判定為InfluA陽性；A管第一熒光通道有Tm值為60℃對應的溶解峰曲線判定為ADV陽性；A管第二熒光通道通道有Tm值為64℃對應的溶解峰曲線判定為InfluB陽性；A管第二熒光通道有Tm值為55℃對應的溶解峰曲線判定為HBoV陽性；A管第三熒光通道有Tm值為57℃的溶解峰曲線判定為RSVA陽性；A管第三熒光通道有Tm值為65℃的溶解峰曲線判定為RSVB陽性；A管第四熒光通道有Tm值為66℃的溶解峰曲線判定為陽性內質控合格；

若B管第一熒光通道有Tm值為63℃對應的溶解峰曲線判定為PIVI陽性；B管第一熒光通道有Tm值為56℃對應的溶解峰曲線判定為PIVII陽性；B管第二熒光通道有Tm值為59℃對應的溶解峰曲線判定為PIVIII陽性；B管第二熒光通道有Tm值為63℃對應的溶解峰曲線判定為PIVIV陽性；B管第三熒光通道有Tm值為65℃對應的溶解峰曲線判定為HRV陽性；B管第四熒光通道有Tm值為66℃的溶解峰曲線判定為陽性內質控合格；

若C管第一熒光通道有Tm值為59℃對應的溶解峰曲線判定為MP陽性；C管第二熒光通道有Tm值為55℃對應的溶解峰曲線判定為LP陽性；C管第三熒光通道有Tm值為68℃對應的溶解峰曲線判定為CP陽性；C管第四熒光通道有Tm值為66℃的溶解峰曲線判定為陽性內質控合格；

若D管第一熒光通道有Tm值為62℃對應的溶解峰曲線判定為HcoV-NL63陽性；D管第一熒光通道有Tm值為59℃對應的溶解峰曲線判定為HcoV-OC43陽性；D管第二熒光通道有Tm值為63℃對應的溶解峰曲線判定為HcoV-HKUI陽性；D管第二熒光通道有Tm值為55℃對應的溶解峰曲線判定為HMPV陽性；D管第三熒光通道有Tm值為69℃對應的溶解峰曲線判定為HcoV-229E陽性；D管第四熒光通道有Tm值為66℃的溶解峰曲線判定為陽性內質控合格。