[發明專利]一株裂解性能強的蛭弧菌誘變株及其應用

有效

• 申請號: 201811591698.3
• 申請日: 2018-12-25
• 公開（公告）號: CN111363690B
• 公開（公告）日: 2021-09-21
• 發明（設計）人: 蔡俊鵬;陳丹
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N13/00;A61K35/741;A61P31/04;C12R1/01
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 崔紅麗

本發明公開一株裂解性能強的蛭弧菌誘變株及其應用，屬于微生物誘變育種技術領域。所述蛭弧菌誘變株為Bdellovibrio sp.BDN?1F2，于2018年6月11日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號：GDMCC NO：60385。本發明利用Co⁶⁰輻照誘導突變法以增強蛭弧菌的裂解性能，有效地提高了蛭弧菌對革蘭氏陰性以及陽性致病菌的裂解能力，拓寬了蛭弧菌的應用范圍、更好地滿足生產實踐的需要。對本發明蛭弧菌誘變株的裂解性能進行檢驗證實可裂解原來不能裂解的兩株致病弧菌，且增強了對革蘭氏陽性菌的裂解能力，為更多以陽性菌為宿主的蛭弧菌分離及性能增強提供了方法基礎。

技術領域

本發明屬于微生物誘變育種技術領域，特別涉及Co⁶⁰輻射誘變在增強一株以枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)為寄生宿主的蛭弧菌裂解性能中的應用，尤其涉及一株裂解性能強的蛭弧菌誘變株及其應用。

背景技術

蛭弧菌是一類能夠裂解其它細菌的小型細菌，它可以寄生并裂解大多數科、屬的革蘭氏陰性細菌，對一些致病菌的裂解作用使其具有了重要的價值。因此大多數蛭弧菌的培養均選擇革蘭氏陰性菌為宿主，常用的如大腸桿菌。

蛭弧菌的生長繁殖也受到各種因素影響，包括宿主。首先要有足夠數量的宿主菌，才能夠保證蛭弧菌與宿主菌的碰撞、粘附和侵入并完成生活史，否則蛭弧菌沒有機會碰撞、粘附、侵入并裂解宿主，會造成自身能量消耗過多而死亡。如宿主為致病或潛在致病菌，則有潛在致病的風險。解決這一問題的方法之一是選擇以游泳體的形式以制備微生態制劑。但是，游泳體制備較繁瑣，且極易死亡，極難存活。故在生產實踐中幾不可能執行。另一可能，則是轉變蛭弧菌的宿主為有益或至少無害的革蘭氏陽性菌。

目前研究表明，蛭弧菌可裂解革蘭氏陰性菌，而不能裂解革蘭氏陽性菌。縱使可裂解極少數革蘭氏陽性菌，其裂解能力也非常之弱。

本實驗室成功分離出一株以枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)為寄生宿主的蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDN-1，對26株致病菌及一株溶藻弧菌(V.alginolyticus)ATCC17749和一株副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)ATCC 17802共28株致病指示菌的裂解率為68％，對其中溶藻弧菌(V.alginolyticus)的裂解率為75％，對副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)的裂解率為50％。其中26株致病菌裂解譜在文獻“201711333688.5、一株海洋蛭弧菌及在氨芐青霉素下促進蛭質體形成的應用”中公開。因此，增強裂解性能是該蛭弧菌應用亟待解決的問題。

野生型蛭弧菌，因其自身的性能難以滿足生產需求，故有改善的必要。微生物誘變育種以誘變的手段改變目標微生物的遺傳結構，進而篩選出優良菌種，有效應用于工業生產。

因此，對以有益或至少無害的革蘭氏陽性菌為宿主的蛭弧菌進行誘變育種，增強其裂解性能，對具有重要意義。傳統誘變育種多以紫外誘變為主，但其突變率不高且需要多次累積突變，極易回復。而Co⁶⁰輻照誘變能獲得較高的突變率和較寬的突變譜，且不易回復。但是通過Co⁶⁰輻照誘變以達到增強蛭弧菌裂解性能的研究，目前尚無任何報道。

發明內容

為了克服現有技術的缺點與不足，本發明的目的在于提供一株裂解性能強的蛭弧菌誘變株。

本發明的另一目的在于提供上述蛭弧菌誘變株的應用。

本發明以Co⁶⁰輻照誘變的方法為手段，以增強蛭弧菌裂解性能為目的，提供一種Co⁶⁰輻照誘導突變在增強一株蛭弧菌裂解性能中的應用。以有效提高以革蘭氏陽性菌為宿主的蛭弧菌對革蘭氏陰性致病菌的裂解能力，并拓寬對革蘭氏陽性菌的裂解，更好地滿足生產實踐的需要。

本發明的目的通過下述技術方案實現：