[發明專利]一種DDT單克隆抗體及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201811590548.0
• 申請日: 2018-12-25
• 公開（公告）號: CN109946455B
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發明（設計）人: 盛相國
• 申請（專利權）人: 蘇州快捷康生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/559
• 分類號: G01N33/559;G01N33/553;G01N33/577
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 談杰

本發明涉及一種DDT單克隆抗體及其制備方法與應用；與現有技術相比，本發明的優點是：1)特異性強，敏感性高；2)簡便、快速。在使用制得的膠體金試紙條時，無需任何其他輔助儀器，可現場操作，只要將檢測樣加入樣品墊，在3至5分鐘內即可判定檢測結果；3)結果顯示形象、直觀、準確；4)節省費用，適用范圍廣，便于推廣；所應用制得的膠體金試紙條，無需專業操作人員及任何輔助類儀器，根據反應所顯現的條帶幾分鐘內即可判定結果，不僅操作簡便、快速、結果直觀準確、成本低，并且可以在室外進行檢測。

技術領域

本發明涉及農產品檢測領域，具體涉及一種DDT單克隆抗體及其制備方法與應用。

背景技術

DDT(Dichlorodiphenyltrichloroethane)又名滴滴涕，屬于有機氯類殺蟲劑，通過對昆蟲體內的神經系統產生中毒作用，首先誘發昆蟲興奮，然后神經傳導阻塞，昆蟲進而痙攣、麻痹、死亡。20世紀上半葉防止農業病蟲害，減輕瘧疾傷寒等蚊蠅傳播的疾病危害起到了不小的作用。但由于其對環境污染過于嚴重，目前很多國家和地區已經禁止使用。世界衛生組織于2002年宣布，重新啟用DDT用于控制蚊子的繁殖以及預防瘧疾、登革熱、黃熱病等。

目前，對農藥殘留的檢測方法主要是儀器分析方法，包括高效液相色譜法(Highperformance liquid chromatography，HPLC)、氣相色譜法(Gas chromatography，GC)、薄層色譜法(Thin layer chromatography，TLC)、液-質串聯法(HPLC-MS)和氣-質串聯法(GC-MS)等。這些方法結果可靠，靈敏度高，已有相關的技術標準可供參考。但由于需要昂貴的儀器、專門的操作人員，以及樣品前處理復雜、成本高、時間長，因此不能更好地滿足快速簡便的現場檢測要求。

與儀器分析方法相比，免疫檢測方法因其簡便、經濟、快速等優點而在農藥殘留檢測領域中受到越來越多的關注。ELISA(Enzyme Linked Immunosorbent Assay)方法是常用的免疫檢測方法，但是其卻有操作步驟相對較多，檢測時間較長，檢測結果不夠直觀，不能在線進行檢測等缺陷。因而ELISA在DDT的快速檢測上的應用受到很大的限制。膠體金試紙條無需專業操作人員及任何輔助類儀器，根據反應所顯現的條帶幾分鐘即可判定結果，不僅操作簡便、快速，且結果直觀準確、成本低。

發明內容

本發明目的是：提供一種DDT單克隆抗體及其制備方法與應用。

本發明的技術方案是：一種DDT單克隆抗體，其抗體重鏈可變區氨基酸序列為：SEQID NO:1；抗體輕鏈可變區氨基酸序列為：SEQ ID NO:2。

本發明還提供了一種DDT單克隆抗體的制備方法，包括以下步驟：

步驟1)DDT半抗原的合成；

步驟2)DDT半抗原與載體蛋白偶聯，并制備包被抗原；

步驟3)DDT單克隆抗體的制備。

進一步的：所述步驟2)DDT半抗原與載體蛋白通過活潑酯法實現偶聯，所述載體蛋白為KLH蛋白。

進一步的：所述步驟2)中制備包被抗原采用活潑酯法，并采用BSA蛋白作為載體蛋白。

進一步的：所述步驟3)DDT單克隆抗體的制備包括以下步驟：

步驟a:采用相同劑量的包被抗原對若干只小鼠進行多次免疫，最后一次超強免疫后3天在無菌條件下取出小鼠脾細胞；

步驟b：將步驟a中所取得的小鼠脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞進行融合與培養，得到培養細胞；

步驟c：對步驟b中所得的培養細胞進行篩選，選擇強陽性、抑制率高、細胞生長旺盛的培養細胞進行亞克隆，然后擴大培養，建立雜交瘤細胞株；