[發明專利]改進的測定方法

在審

• 申請號: 201811589404.3
• 申請日: 2014-03-13
• 公開（公告）號: CN110055304A
• 公開（公告）日: 2019-07-26
• 發明（設計）人: A.阿格文揚;E.N.格萊澤;J.肯坦;G.西格爾;M.斯滕格林
• 申請（專利權）人: 中尺度技術有限責任公司
• 主分類號: C12Q1/6804
• 分類號: C12Q1/6804;G01N33/533;G01N33/543;G01N33/569
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 張文輝;凃滔

1.一種檢測樣品中的目的分析物的方法，包括：

a.使分析物結合：(i)表面上的捕捉試劑，該表面包含針對該分析物的所述捕捉試劑，和包含錨定寡核苷酸序列的錨定試劑；(ii)針對該分析物的第一檢測試劑，其連接于第一核酸探針；和(iii)針對該分析物的第二檢測試劑，其連接于第二核酸探針；由此在表面上形成包含結合試劑、該分析物和所述第一和第二檢測試劑的復合物；

b.利用需要所述第一和第二探針接近的延伸過程，延伸所述第二探針以形成延伸序列，其包含與所述錨定序列互補的錨定序列互補體；

c.將所述錨定序列與所述錨定序列互補體雜交；并

d.測量結合至表面的延伸序列的量。

2.權利要求1的方法，其中所述錨定寡核苷酸序列包含雙鏈寡核苷酸序列。

3.權利要求1的方法，其中所述延伸序列還包含一個或多個經修飾的堿基，且所述測量步驟還包括使所述延伸序列與能夠結合所述一個或多個經修飾的堿基的多種可檢測模塊接觸。

4.權利要求3的方法，其中所述一個或多個經修飾的堿基包含適體、適體配體、抗體、抗原、配體、受體、半抗原、表位、或模擬位，且所述多種可檢測模塊各包含所述一個或多個經修飾的堿基的結合伴侶和可檢測的標記。

5.權利要求4的方法，其中所述一個或多個經修飾的堿基包含鏈霉親合素且所述多種可檢測模塊各包含生物素和可檢測的標記。

6.權利要求4的方法，其中所述一個或多個經修飾的堿基包含生物素且所述多種可檢測模塊各包含鏈霉親合素和可檢測的標記。

7.權利要求4的方法，其中所述一個或多個經修飾的堿基包含親合素且所述多種可檢測模塊各包含生物素和可檢測的標記。

8.權利要求4的方法，其中所述一個或多個經修飾的堿基包含生物素且所述多種可檢測模塊各包含親合素和可檢測的標記。

9.權利要求1的方法，其中所述延伸步驟包括使所述探針結合模板核酸序列并通過聚合酶鏈式反應延伸該探針。

10.權利要求1的方法，其中在探針延伸后所述延伸的探針保持定位于所述表面上。

11.權利要求10的方法，其中所述復合物在該延伸步驟后保持結合于所述表面。

12.權利要求11的方法，其中所述延伸的探針在所述表面上復合物位置的10-100um以內的位置處結合于所述錨定試劑。

13.權利要求1的方法，其中所述延伸步驟包括PCR(聚合酶鏈式反應)、LCR(連接酶鏈式反應)、SDA(鏈置換擴增)、3SR(自維持合成反應)、或等溫擴增方法。

14.權利要求13的方法，其中所述延伸步驟包括等溫擴增方法。

15.權利要求14的方法，其中所述等溫擴增方法是螺旋酶依賴性擴增或滾環擴增(RCA)。

16.權利要求1的方法，其中所述延伸過程包括使步驟(a)中形成的復合物與包含以下的連接體序列接觸：(i)與所述第二探針互補的內部序列和(ii)與所述第一探針的非重疊性區域互補的兩個端序列。

17.權利要求16的方法，其還包括將該連接寡核苷酸的所述兩個端序列連接以形成與所述第二和第二探針兩者雜交的環狀靶序列。