[發明專利]一種檢測鹽酸可樂定的免疫層析試紙條的制備

在審

• 申請號: 201811588307.2
• 申請日: 2018-12-25
• 公開（公告）號: CN111366723A
• 公開（公告）日: 2020-07-03
• 發明（設計）人: 杜霞;秦悅;袁超
• 申請（專利權）人: 南京億特生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/558;G01N33/531;G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明鹽酸可樂定的免疫膠體金檢測卡及其制備方法,涉及β?腎上腺素受體激動劑檢測技術領域。本發明的檢測卡外殼中的試紙條，由PVC膠板、樣品墊、膠體金結合墊、包被膜和吸水墊組成；膠體金膜為含鹽酸可樂定單克隆抗體的玻璃纖維素膜，包被膜是硝酸纖維素膜，其上設有T線和C線，T線包被有鹽酸可樂定蛋白質偶聯物，C線包被有羊抗鼠IgG抗體。本發明有效用于快速檢測鹽酸可樂定，方便、快捷、結果準確。

技術領域

本發明涉及動物源食品添加劑檢測技術領域，特別是涉及鹽酸可樂定的免疫膠體金檢測卡及其制備方法。

背景技術

鹽酸可樂定( Clonidine hydrochloride，分子式：C₉H₉C_l2N₃?HCl，分子量：266.56)是一種抗高血壓藥物，其藥理作用主要為通過刺激腦干α2 -腎上腺受體導致交感神經從中樞神經系統的傳出減少，從而降低外周阻力、腎血管阻力、心率以及血壓，其常見的副作用有口干、瞌睡、頭暈、鎮靜、呼吸抑制等。食用含有可樂定殘留的動物源性產品，對人體健康具有一定的危害性。農業部于2010年12月27日發布中國人民共和國農業部第1519號公告，禁止在飼料和動物飲水中使用鹽酸可樂定。

近年開始出現將鹽酸可樂定用于促進動物生長和改善酮體組成的研究，推斷其主要的作用機理為通過促進下丘腦生長腺素神經元合成和釋放生長腺素，進而調節腺垂體細胞內cAMP水平，從而調控生長激素分泌，促進生豬生長。動物研究表明在豬飼糧中添加0.5mg /kg鹽酸可樂定，能顯著提高豬的瘦肉率和眼肌面積，降低脂肪比率和背膘厚，改善豬的胴體組成。

檢測動物尿液中鹽酸可樂定的含量顯得更直接、方便，且可實現宰前檢測，為及時排除食品安全隱患，保障食品的質量安全，特開展本試驗方法研究。本發明的目的是研制一種更適合企業進行現場檢測且快捷簡便、成本低廉的定性檢測方法。

發明內容

針對以上情況，本發明的目的就是為了克服現有技術存在的缺陷而提供一種鹽酸可樂定的免疫膠體金檢測卡及其制備方法，可有效解決能快速、簡便地檢測出β-腎上腺素受體激動劑鹽酸可樂定的問題。

本發明的鹽酸可樂定膠體金檢測卡，包括包被了單克隆抗體膠體金標記物的膠體金結合墊、包被了鹽酸可樂定-BSA和羊抗鼠IgG的硝酸纖維素膜、樣品墊、吸水墊、PVC膠板和塑料模具組成，在PVC膠板的一端依次粘附樣品墊、結合墊，中間黏貼硝酸纖維素膜，另一端粘附吸水墊。

本發明的鹽酸可樂定膠體金檢測卡的制備方法，是由以下步驟實現：

(1)膠體金溶液制備：取1 L 三角燒瓶1個，加入超純水495 mL，而后加入1%氯金酸(HAuCl₄·3H₂O) 5 mL，配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液，加熱煮沸后在持續攪拌的情況下加入1%檸檬酸三鈉(Na₃C₆H₅O₇·2H₂O)溶液5-7 mL，繼續攪拌加熱，當溶液的顏色完全變為透明的紫紅色時，維持5 min后停止加熱，補水至原體積，冷卻至室溫，2-8℃保存備用；

(2)抗體的預處理：將要標記的鹽酸可樂定抗體在1000 r/min, 4℃條件下，離心20min，取上清，用0.01 mol/L PBS稀釋成1 mg/mL；或者用0.01 mol/L PBS稀釋成1 mg/ml，過0.22 μm濾膜；