[發明專利]焦磷酸檸檬酸鐵原料細菌內毒素的檢查方法

在審

• 申請號: 201811588104.3
• 申請日: 2018-12-25
• 公開（公告）號: CN109613250A
• 公開（公告）日: 2019-04-12
• 發明（設計）人: 孫毅
• 申請（專利權）人: 中國大冢制藥有限公司
• 主分類號: G01N33/579
• 分類號: G01N33/579
• 代理公司: 天津市宗欣專利商標代理有限公司 12103
• 代理人: 陶慧英

本發明公開了一種焦磷酸檸檬酸鐵原料細菌內毒素的檢查方法，包括以下步驟：將焦磷酸檸檬酸鐵原料用細菌內毒素檢查用水配制成濃度為0.6g/10ml的樣品溶液S，再用細菌內毒檢查用水將樣品溶液S稀釋40倍，即溶液A(S₄₀)。用靈敏度0.06EU/ml的鱟試劑進行細菌內毒素檢查，37±1℃試管恒溫儀中，保溫60±2分鐘，將試管從恒溫儀中輕輕取出，緩緩倒轉180°，若管內凝膠不變形，不從管壁滑脫者為陽性；凝膠不能保持完整從管壁滑脫者為陰性。本發明的試驗方法科學，試驗結果準確，填補了焦磷酸檸檬酸鐵原料細菌內毒素檢查方法的空白，具有廣闊的應用前景。

技術領域

本發明涉及鱟屬溶成劑的生物物質，具體是一種焦磷酸檸檬酸鐵原料細菌內毒素的檢查方法。

背景技術

焦磷酸檸檬酸鐵作為一個鐵的替代產品，以幫助維持透析依賴的慢性腎臟疾病患者維持血紅蛋白。2014年11月，FDA腫瘤藥物顧問委員會通過投票認為焦磷酸檸檬酸鐵收益超過了其風險，推薦完全批準這款藥物，該藥物旨在非侵襲性地向透析患者骨髓輸送鐵。

隨著制藥工業的發展和科學技術的進步，人們發現革蘭氏陰性菌細胞壁上的一種脂多糖(Lipoplysaccharide)和微量蛋白(Protein)的復合物——細菌內毒素，它的特殊性不是細菌或細菌的代謝產物，而是細菌死亡或解體后才釋放出來的一種具有內毒素生物活性的物質，當機體內毒素濃度閾值>0.005ng/ml時，即可刺激體溫調節中樞導致機體發熱。

細菌內毒素檢查法系利用鱟試劑來檢測或量化由革蘭陰性菌產生的細菌內毒素，以判斷供試品中細菌內毒素的限量是否符合規定的一種方法。鱟試劑是從棲生于海洋的節肢動物“鱟”的蘭色血液中提取變形細胞溶解物，經低溫冷凍干燥而成的生物試劑，專用于細菌內毒素檢測。目前國際上銷售的鱟試劑有兩種，一種稱美洲鱟試劑(LAL)，由美國生產；另一種稱東方鱟試劑(TAL)。TAL與LAL有相同的功效。細菌內毒素的量用內毒素單位(EU)表示。鱟試劑法檢查內毒素的靈敏度為0.0001pg/ml，比家兔法靈敏10倍，操作簡單易行，試驗費用低，結果迅速可靠，特別適用于注射用原輔料、注射劑生產過程中的熱原控制和家兔法不能檢測的某些細胞毒性藥物制劑，也是受到各國藥典承認的一種通用方法。

由于焦磷酸檸檬酸鐵原料中國國內少有產品上市，且《中國藥典》2015版藥典并未收載此原料，在設計細菌內毒素檢查方法上存在極大的困難，所以，提出一種焦磷酸檸檬酸鐵原料細菌內毒素的檢查方法是非常有必要的。

發明內容

本發明就是為了填補檢測焦磷酸檸檬酸鐵原料細菌內毒素領域的空白，所提出的一種焦磷酸檸檬酸鐵原料細菌內毒素的檢查方法。

本發明是按照以下技術方案實現的。

一種焦磷酸檸檬酸鐵原料細菌內毒素的檢查方法，包括以下步驟：

a.溶液的制備

溶液A：取焦磷酸檸檬酸鐵原料，加入細菌內毒素檢查用水，配制成濃度為0.6g/10ml的樣品溶液S，用細菌內毒檢查用水將樣品溶液S稀釋40倍，即溶液A(S₄₀)；

溶液C：用細菌內毒素檢查用水與細菌內毒素標準品制成分別含細菌內毒素濃度2.0λ、1.0λ、0.5λ和0.25λ的內毒素溶液，即溶液C，每一濃度平行各做2支；

溶液B：將溶液A與細菌內毒素標準品制成分別含細菌內毒素濃度2λ、1λ、0.5λ和0.25λ的內毒素溶液，即溶液B，每一濃度平行各做4支；

溶液D：細菌內毒素檢查用水，平行做2支；

b.細菌內毒素限值的確定