[發明專利]一種定量檢測茶樹籽三萜皂苷的UPLC-UV-QTOF-MS/MS方法

在審

• 申請號: 201811586998.2
• 申請日: 2018-12-25
• 公開（公告）號: CN109765308A
• 公開（公告）日: 2019-05-17
• 發明（設計）人: 李博;屠幼英;吳學進;吳嘉璠;劉亞文
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 朱瑩瑩

本發明屬于天然產物檢測技術領域，具體涉及一種對茶樹籽(Camellia sinensis(L.)O.Kuntze)中三萜類皂苷的UPLC?PDA?MS/MS的定量檢測方法。一種定量檢測茶樹籽三萜皂苷的UPLC?UV?QTOF?MS/MS方法，包括如下步驟：(1)取待測樣品預處理；(2)取茶樹籽中已知的任意1個或多個皂素化合物，制備標準品溶液；(3)將供試品溶液和標準品溶液高效液相色譜/紫外/質譜聯用設備(UPLC?PDA?QTOF?MS/MS)，采用串聯質譜進行結構鑒定，采用外標法在PDA檢測器下進行定量檢測。本發明定量結果更加準確；靈敏度高；樣品需要量少。

技術領域

本發明屬于天然產物檢測技術領域，具體涉及一種對茶樹籽(Camellia sinensis(L.)O.Kuntze)中三萜類皂苷的UPLC-PDA-MS/MS的定量檢測方法。

背景技術

茶樹籽(Camellia sinensis(L.)O.Kuntze)具有多種生物活性，被認為是繼茶葉之后的茶樹另一重要資源。特別是其中的三萜皂素，不僅具有良好的表面活性和去污能力，還具有抗菌消炎、抗腫瘤、改善酒精引起的腸胃損傷、抑制胃排空、促進植物對微量元素的吸收等生物藥理功能。目前已從中國、日本、印度、斯里蘭卡等國家的茶樹種子種先后分離到50多種三萜皂素類物質，但結構相似，極性相近，為分離純化和檢測鑒定帶來的很大困難，嚴重阻礙了對這類化合物的深入研究和開發應用。

目前對茶樹籽皂素的檢測尚沒有理想的定量檢測方法。《出口茶皂素中皂甙含量的測定》(進出口行業標準SN/T1852-2006)采用重量法，即先測得皂苷元質量，再換算成皂苷質量分數。該法只適合測含量為30％-70％的茶皂苷樣品，樣品需要量較大，耗時長，誤差大，不適合少量樣品的檢測。濃硫酸(或高氯酸)-香草醛比色法是測定皂素的常用方法，但是容易受到樣品中其他雜質的干擾，使檢測結果偏高；另外無法準確定量皂素單體化合物。目前急需建立一套針對茶籽皂素的有效的定量檢測方法，以利于今后的研究和產品開發。

發明內容：

本發明要解決的問題是建立一種UPLC-UV-QTOF-MS/MS(超高效液相色譜-紫外-四級桿串聯飛行時間質譜聯用)的檢測方法，對茶樹籽中的皂素進行定量檢測。

一種定量檢測茶樹籽三萜皂苷的UPLC-UV-QTOF-MS/MS方法，包括如下步驟：

(1)取待測樣品干燥磨碎，過篩，以甲醇或乙醇水溶液提取，可直接用于檢測；或將粗提取液濃縮后經過正己烷或石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，將正丁醇相進一步用大孔樹脂或沉淀法純化總皂素部分，再進行檢測；

(2)取茶樹籽中已知的任意1個或多個皂素化合物，制備標準品溶液；

(3)將供試品溶液和標準品溶液高效液相色譜/紫外/質譜聯用設備(UPLC-PDA-QTOF-MS/MS)，采用串聯質譜進行結構鑒定，采用外標法在PDA檢測器下進行定量檢測：

色譜柱為ACQUITY UPLC HSS T3色譜柱(1.8μm,150mm×2.1mm i.d.,Waters)；

色譜條件為：流動相A(0.1％甲酸/水)，B相(0.1％甲酸/乙腈)；梯度洗脫，0-4min,梯度洗脫，(32-35％)–(35-38％)B；4-32min,等度洗脫(35-38％)B；32-58min,梯度洗脫，(35-38％)–(43-48％)B；58-60min,等度洗脫，(32-35％)B。柱溫，25℃；流速，0.2-0.3mL/min；進樣量，5μL；檢測波長：205-215nm。

質譜條件為：采用負離子掃描模式；掃描范圍：m/z 100-2000；霧化氣(GS1)：50psi；