[發(fā)明專利]一種用于細(xì)菌的虹吸導(dǎo)管補(bǔ)料搖床培養(yǎng)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811583281.2
• 申請(qǐng)日: 2018-12-24
• 公開（公告）號(hào): CN109576183B
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉志強(qiáng);沈水興;沈昊;劉政
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海智城分析儀器制造有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N1/36;C12N15/01;C12Q1/10;C12R1/19
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 萬(wàn)尾甜;韓介梅

一種用于細(xì)菌的虹吸導(dǎo)管補(bǔ)料搖床培養(yǎng)方法，該方法是以補(bǔ)料搖床為基礎(chǔ)，增設(shè)功能性虹吸導(dǎo)管固體培養(yǎng)連接器使多只搖瓶串連，從第一只培養(yǎng)瓶加入目標(biāo)菌株開始，由虹吸導(dǎo)管連通構(gòu)成固液交替發(fā)酵至最后一只搖瓶結(jié)束，進(jìn)而獲得有目的的快速多次培養(yǎng)。本發(fā)明的方法可用于細(xì)菌淀粉糖化酶菌株的誘變以及樣品中大腸桿菌的檢測(cè)，其中功能性虹吸導(dǎo)管所用的材料、管徑大小、導(dǎo)管的長(zhǎng)度、導(dǎo)管內(nèi)載體成分配制等對(duì)目標(biāo)菌株培養(yǎng)有關(guān)鍵性影響，因此虹吸導(dǎo)管可根據(jù)不同使用專一設(shè)計(jì)；本發(fā)明為利用補(bǔ)料搖床從事微生物菌株馴化、分離、誘變與檢測(cè)提供新的技術(shù)手段，適合廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、飼料和生物制品等領(lǐng)域。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物學(xué)研究的技術(shù)方法與搖床設(shè)備制造領(lǐng)域，尤其涉及一種用于細(xì)菌的虹吸導(dǎo)管補(bǔ)料搖床培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

搖床是利用三角搖瓶振蕩發(fā)酵研究微生物的重要工具，歷史悠久應(yīng)用廣泛。補(bǔ)料搖床目的是通過(guò)及時(shí)向三角搖瓶?jī)?nèi)補(bǔ)加營(yíng)養(yǎng)和調(diào)整瓶?jī)?nèi)發(fā)酵液PH改善發(fā)酵環(huán)境延長(zhǎng)發(fā)酵時(shí)間，增加發(fā)酵產(chǎn)物；補(bǔ)料賦予傳統(tǒng)搖床新的功能。

菌種馴化、分離與誘變是微生物培養(yǎng)研究的重要技術(shù)手段，三者即獨(dú)立又相互關(guān)聯(lián)。馴化是第一位，運(yùn)用達(dá)爾文生物進(jìn)化理論“環(huán)境選擇，適者生存”為基礎(chǔ)，分為三個(gè)不同生態(tài)位調(diào)整過(guò)程，第一生態(tài)位調(diào)整是保持原始營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)下(菌泥)室內(nèi)先液體培養(yǎng)使菌株得到恢復(fù)，再固體培養(yǎng)用肉眼可以識(shí)別，使新環(huán)境下適應(yīng)菌株得到二次恢復(fù)，不適應(yīng)的菌株被淘汰。第二生態(tài)位調(diào)整是根據(jù)需要改變培養(yǎng)基環(huán)境，適應(yīng)生存使更多菌株被分離淘汰；第三生態(tài)位調(diào)整是通過(guò)再次改變培養(yǎng)環(huán)境選擇個(gè)體菌株并激發(fā)其工作能力用于生產(chǎn)。每一過(guò)程都是固體培養(yǎng)與液體搖床發(fā)酵分別交替進(jìn)行并反復(fù)多次。

本發(fā)明提供與一種全新的培養(yǎng)方法，在補(bǔ)料搖床的基礎(chǔ)上增設(shè)多功能虹吸導(dǎo)管，是在導(dǎo)管里設(shè)置固體培養(yǎng)基再連接搖瓶，使目前固液分別交替培養(yǎng)操作融合在搖床上一次完成，根據(jù)需要選擇設(shè)計(jì)虹吸導(dǎo)管，是對(duì)補(bǔ)料搖床應(yīng)用的重大技術(shù)改進(jìn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種用于細(xì)菌的虹吸導(dǎo)管補(bǔ)料搖床培養(yǎng)方法，該方法是一種全新的培養(yǎng)方法，在補(bǔ)料搖床的基礎(chǔ)上增設(shè)多功能虹吸導(dǎo)管，是在導(dǎo)管里設(shè)置固體培養(yǎng)基再連接搖瓶，使目前固液分別交替培養(yǎng)操作融合在搖床上一次完成，根據(jù)需要選擇設(shè)計(jì)虹吸導(dǎo)管，是對(duì)補(bǔ)料搖床應(yīng)用的重大技術(shù)改進(jìn)。

本發(fā)明通過(guò)以下方案實(shí)現(xiàn)：

一種用于細(xì)菌的虹吸導(dǎo)管補(bǔ)料搖床培養(yǎng)方法，以補(bǔ)料搖床為基礎(chǔ)，所述的補(bǔ)料搖床含有多只搖瓶，搖瓶?jī)?nèi)設(shè)置培養(yǎng)液，將相鄰兩只搖瓶用功能性虹吸導(dǎo)管固體培養(yǎng)連接器連接，最終使多只搖瓶依次串連，所述的功能性虹吸導(dǎo)管固體培養(yǎng)連接器包括虹吸導(dǎo)管，在虹吸導(dǎo)管的兩端設(shè)置有針頭，分別插入相鄰兩只搖瓶?jī)?nèi)且與培養(yǎng)液液面不接觸，虹吸導(dǎo)管內(nèi)設(shè)置有吸附載體和固態(tài)培養(yǎng)基，僅在第一只搖瓶?jī)?nèi)加入目標(biāo)菌株，通過(guò)補(bǔ)料搖床振蕩從而實(shí)現(xiàn)固液交替培養(yǎng)，在最后一只搖瓶中獲得產(chǎn)品。

上述技術(shù)方案中，虹吸導(dǎo)管可以采用硅膠管、醫(yī)用塑料管、不銹鋼管、玻璃管等；內(nèi)徑通常為0.25～5.0mm，管線長(zhǎng)通常為30～300mm，導(dǎo)管兩端用針頭為8～20號(hào)針頭，針柄長(zhǎng)度25～150mm；虹吸導(dǎo)管內(nèi)的吸附載體材料包括棉線、脫脂棉、納米人造纖維、吸水凝膠、瓊脂等；但是功能性虹吸導(dǎo)管所用的材料、管徑大小、導(dǎo)管的長(zhǎng)度、針頭尺寸、導(dǎo)管內(nèi)載體成分配制等對(duì)目標(biāo)菌株培養(yǎng)均有關(guān)鍵性影響，因此虹吸導(dǎo)管可根據(jù)不同使用目的進(jìn)行專一設(shè)計(jì)；

當(dāng)本發(fā)明方法用于細(xì)菌淀粉糖化酶菌株的誘變，所述的虹吸導(dǎo)管采用內(nèi)徑2-3mm的玻璃管，長(zhǎng)度60mm，在管內(nèi)設(shè)置有瓊脂，并在管內(nèi)貫穿浸有碘液的棉線，針頭選用內(nèi)徑0.35mm注射器針頭,針柄長(zhǎng)度50～60mm；各搖瓶?jī)?nèi)設(shè)置營(yíng)養(yǎng)液，針頭與液面距離2～3cm，從第二只搖瓶開始每隔一只搖瓶?jī)?nèi)加入誘變劑，整體滅菌后，在第一只搖瓶?jī)?nèi)加入目標(biāo)菌種枯草桿菌BF7658，于溫度35～37℃進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，當(dāng)各虹吸導(dǎo)管內(nèi)棉線藍(lán)色消失，在最后一只搖瓶?jī)?nèi)獲得穩(wěn)定誘變的適應(yīng)淀粉酶細(xì)菌菌株。