[發明專利]一種異體源富血小板凝膠因子的制備方法

有效

• 申請號: 201811582193.0
• 申請日: 2018-12-24
• 公開（公告）號: CN109846902B
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發明（設計）人: 初相伍;王峰;徐峰波;孫祿偉;張曉東
• 申請（專利權）人: 黑龍江省恒生干細胞工程有限公司;銀豐生物工程集團有限公司
• 主分類號: A61K35/19
• 分類號: A61K35/19;A61K9/06;A61P17/02;A61P19/08;A61L27/54
• 代理公司: 山東舜天律師事務所 37226
• 代理人: 李新海

本發明公開了一種異體源富血小板凝膠因子的制備方法：(一)臍帶血采集；(二)第一次離心：將血樣離心，離心參數為1500r/min，10min；離心后吸取上清層、中間層及紅細胞層上端0.5～1mm，進行第二次離心；(三)第二次離心：離心參數為2800r/min，10min；離心后，吸取上層液體，直至下層剩余5ml，此即為富血小板因子；(四)將富血小板因子與氯化鈣?牛凝血酶溶液以體積比1:8～10的比例混合，混勻，靜置2分鐘以上，即得富血小板因子凝膠。利用本發明的方法制備的異體源富血小板凝膠因子可用于異體治療，且濃度可達原全血濃度的9倍，可用于急慢性創傷修復，可作為復合人工骨用于骨折不愈合的治療。

技術領域

本發明涉及一種異體源富血小板凝膠因子的制備方法，屬于血液制品技術領域。

背景技術

富血小板因子是自體全血經過梯度離心、分離得到的血小板濃縮物，血小板含量豐富。人體血液中正常血小板濃度為100,000μl～350,000μl，平均為200,000μl，富血小板因子中血小板濃度一般為全血的3～10倍。當血小板激活時，能釋放多種生長因子，它們在促進骨細胞和成骨細胞的增殖、生長、分化和組織的形成過程中起著重要的作用。自1998年Marx等首次用富血小板因子復合移植骨修復下頜骨缺損以來，富血小板因子已逐漸應用于口腔、整形、骨科、耳鼻喉科、神經外科等領域的組織修復中。

到目前為止，國際上尚無統一標準化的富血小板因子提取方法?，F有技術中，富血小板因子的制備方法主要分為兩種，一種是機器制備，機器制備富血小板因子相對于手工制備而言血小板含量和生長因子濃度都要高，而且機器制備富血小板因子簡便、快速、安全、高效，但價格昂貴。目前常用的設備有Curasau系統、Platelet concemtratecollection系統、Smat PRe P系統、Trissee系統等。由于機器制備富血小板因子的成本很高，且制備的血小板不易保存，目前很難廣泛應用于臨床之中，僅限于實驗室研究使用。另一種方法是手工制備,經過幾年的探索研究，目前主要制備方法有：1Anitua法；2Landesberg法；3Aghaloo；4Petrungaro法。手工制備富血小板因子步驟簡單、操作容易、對設備要求低。

目前應用較為廣泛的手工制備方法是二次離心法，首先使用檸檬酸鹽作為抗凝劑螯合血液中的鈣離子防止血液凝固。第1次離心通常使用較低的轉速，目的主要是利用血液中不同細胞的沉降速度不同，將紅細胞(直徑約7um)和白細胞(直徑約7-15um)與血小板(約2um)分離。第2次離心的目的是通過較高的轉速使血漿中的血小板更加濃縮，并最終將富血小板血架與貧血小板血梁分離。得到之后，在應用之前，還要對其進行激活。血小板在激活劑的作用下，會引起a顆粒(致密顆粒)的脫顆粒作用，釋放出其內部儲存的多重生長因子，發揮生物學效應。血小板被激活劑激活后，在短時間內會釋放大量的生長因子。

現有技術中提取制備的富血小板因子及方法，尚存在以下不足之處：

1、富血小板因子一般都是從患者的自身血液中分離獲得，不能進行異體使用。

2、自體來源的富血小板因子，因采集于自體外周血，青壯年期采集的樣本活力較強，效果較好。但對于自身患有某些疾病或年齡較大的人群來說，使用效果較差。從自身患有某種疾病或年齡較大的人體來抽取血液，本身對個體存在著一定損害，進一步加重病情的衍化。另外，自身患有某種疾病時或隨著年齡的增加，血小板活性變差，血小板釋放生長因子能力降低，進一步影響富集血小板的治療效果。

3、一步離心法，由于離心的轉速和時間的限制，血小板不能被充分離心，收集的富血小板因子中血小板的濃縮倍數有限，一般約為3～4倍；血漿中仍殘留有一定量的紅細胞，導致最終制備的富血小板因子中也含有一定量的紅細胞。