[發明專利]利用地衣芽孢桿菌發酵生產納米硒的方法

有效

• 申請號: 201811580323.7
• 申請日: 2018-12-24
• 公開（公告）號: CN109504635B
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發明（設計）人: 郭巖彬;鄒曉陽;余圣;吳文良;張灑灑;胡軼銘
• 申請（專利權）人: 江西省水投富硒產業發展有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P3/00;C12R1/10
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

1.利用地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)S13發酵生產納米硒的方法，所述地衣芽孢桿菌S13的保藏編號為CGMCC No.11742，其特征在于，包括以下步驟：

S1、菌種活化；

S2、種子液的制備；

S3、納米硒發酵：將S2的種子液接入發酵培養基中，加入亞硒酸鹽溶液，使發酵體系中亞硒酸鹽的終濃度在5-100mM，進行發酵培養，發酵結束后，從發酵產物中分離純化納米硒；

所述發酵培養基的配方為：葡萄糖5-25g/L或淀粉質碳源10-45g/L、酵母提取物5-25g/L、大豆蛋白胨5-25g/L、氯化鈉10g/L、硫酸銨2g/L、氯化銨1g/L、氯化鈣0.3g/L、磷酸二氫鉀0.3g/L、硫酸鎂0.3g/L，pH7.0-7.2；

其中，所述淀粉質碳源選自玉米粉、馬鈴薯淀粉、小麥淀粉或其它可溶性淀粉中的至少一種。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述發酵培養基的配方為：葡萄糖10-20g/L或淀粉質碳源40-45g/L、酵母提取物10-20g/L、大豆蛋白胨10-20g/L、氯化鈉10g/L、硫酸銨2g/L、氯化銨1g/L、氯化鈣0.3g/L、磷酸二氫鉀0.3g/L、硫酸鎂0.3g/L，pH7.0-7.2。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，S3的發酵條件為：溫度35-38℃，轉速150-250rpm，通氣量0.5-1.5vvm，發酵時間24-72h。

4.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，S3中按2-5％v/v的接種量將種子液接入裝有所述發酵培養基的搖瓶或發酵罐中，搖瓶裝液量為20-30％，發酵罐裝液量不超過80％。

5.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，S1具體為：用SOC培養基對地衣芽孢桿菌進行活化培養，SOC培養基的配方為：胰蛋白胨16g/L，酵母提取物5g/L，氯化鈉5g/L，氯化鉀2.5mM，氯化鎂10mM，葡萄糖20mM，瓊脂15g/L，pH 7.0-7.2；將地衣芽孢桿菌接種于SOC培養基斜面上，37℃培養48h。

6.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，S2具體為：用SOB液體培養基進行種子培養，SOB液體培養基的配方為：胰蛋白胨20g/L，酵母提取物5g/L，氯化鈉5g/L，氯化鉀2.5mM，氯化鎂10mM，pH 7.0-7.2；將S1活化好的地衣芽孢桿菌用無菌生理鹽水配制成10⁸CFU/mL的菌懸液，以1％v/v的接種量接種于SOB液體培養基中，37℃、150-250rpm振蕩培養4-8h。

7.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)菌種活化，同權利要求5中所述；

2)種子液的制備：將S1活化好的地衣芽孢桿菌用無菌生理鹽水配制成10⁸CFU/mL的菌懸液，以1％v/v的接種量接種于SOB液體培養基中，37℃、150rpm振蕩培養8h；

3)納米硒發酵：將2)的種子液按2％v/v的接種量接入裝有發酵培養基的發酵罐中，裝液量65％，加入亞硒酸鈉溶液，使發酵體系中亞硒酸鈉的終濃度在10mM，在37℃、180rpm、通氣量0.5vvm條件下培養，發酵時間24h，發酵結束后，從發酵產物中分離純化納米硒；

其中，所述發酵培養基的配方為：葡萄糖10g/L、酵母提取物10g/L、大豆蛋白胨10g/L、氯化鈉10g/L、硫酸銨2g/L、氯化銨1g/L、氯化鈣0.3g/L、磷酸二氫鉀0.3g/L、硫酸鎂0.3g/L，pH7.0-7.2。

8.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)菌種活化，同權利要求5中所述；

2)種子液的制備：將S1活化好的地衣芽孢桿菌用無菌生理鹽水配制成10⁸CFU/mL的菌懸液，以1％v/v的接種量接種于SOB液體培養基中，37℃、150rpm振蕩培養4h；

3)納米硒發酵：將2)的種子液按4％v/v的接種量接入裝有發酵培養基的發酵罐中，裝液量70％，加入亞硒酸鈉溶液，使發酵體系中亞硒酸鈉的終濃度在10mM，在37℃、200rpm、通氣量1.2vvm條件下培養，發酵時間72h，發酵結束后，從發酵產物中分離純化納米硒；

其中，所述發酵培養基的配方為：玉米粉40g/L、酵母提取物10g/L、大豆蛋白胨15g/L、氯化鈉10g/L、硫酸銨2g/L、氯化銨1g/L、氯化鈣0.3g/L、磷酸二氫鉀0.3g/L、硫酸鎂0.3g/L，pH7.0-7.2。